猪圆环病毒2型(PCV2)是一种新近发现的猪传染性疾病的病原,它与多种猪病的发生密切相关,如猪皮炎肾病综合征、繁殖障碍、猪呼吸道综合征、肉芽肿性肠炎、坏死性淋巴腺炎、渗出性皮炎和仔猪先天性震颤等,其中影响最为严重的是断奶仔猪多系统衰竭综合征PMWS,该病已在全世界范围内广泛存在,给全球养猪业造成了巨大的经济损失,但目前其致病机制还不是很清楚。已有研究表明,该病的发生还与氧化应激有关。硒是动物和人所必需的微量元素之一,具有增强机体抗氧化能力、提高机体免疫力、抵抗病毒感染等多种重要的生物学功能。当前研究显示,硒主要以硒半胱胺酸的形式掺入硒蛋白中,通过后者发挥其生物学功能,但对于很多硒蛋白具体的生物学功能与作用还有待于进一步地去研究、认识。富硒酵母主要含硒蛋氨酸,与无机硒(如亚硒酸钠)相比,它具有毒性小、生物利用率高的特点。本论文主要对PCV2的感染和复制与宿主细胞氧化还原状态之间的相互作用关系及其机理、硒影响PCV2感染与复制的机理、硒对PCV2感染阳性猪场断奶仔猪生长、抗氧化能力、PCV2感染水平以及免疫机能的影响进行了研究和探讨,以期从宿主氧化应激的角度阐述PCV2的致病机制,为硒特别是有机硒在养猪生产上的广泛应用提供理论依据。试验一：PCV2的感染和复制与宿主细胞氧化还原状态之间的相互作用研究本试验对PCV2的感染和复制与宿主细胞氧化还原状态之间的相互作用关系进行了研究。试验结果显示,PCV2感染后48小时细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)和超氧化物歧化酶(SOD)活性均显著降低,而主要脂质过氧化代谢产物MDA的浓度在PCV2感染后48小时显著升高。GSH生成前体N-乙酰半胱氨酸NAC处理细胞能显著增加细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)的浓度,进而抑制PCV2的复制。相反,利用H202的氧化性降低细胞内的还原型谷胱甘肽(GSH)浓度能促进PCV2的复制。本试验研究结果表明,PCV2感染改变了宿主细胞的氧化还原状态,导致氧化应激的产生,同时,宿主细胞氧化还原状态的改变也可影响PCV2的复制。试验二：活性氧(ROS)通过NF-κB信号途径调节猪圆环病毒2型(PCV2)的复制研究表明,细胞内的氧化还原状态对不同病毒在宿主细胞内的复制有不同的影响。本试验主要研究了活性氧(ROS)对猪圆环病毒2型(PCV2)在PK15细胞中复制的影响。试验结果显示,PCV2感染后PK15细胞中ROS水平升高,并随着时间的推移而变化,在感染后72小时达到最高,而后逐渐下降。抗氧化物N-乙酰半胱氨酸NAC能够降低PK15细胞内的ROS水平进而抑制PCV2的复制；相反地,还原型谷胱甘肽(GSH)合成酶抑制剂BSO则可提高PK15细胞内的ROS水平并促进PCV2的复制。通过抑制剂BAY11-7082抑制NF-κB信号途径的激活后发现,BSO诱导的ROS升高不再促进PCV2的复制。本试验研究结果表明,PCV2感染本身会诱导宿主细胞产生ROS; ROS可通过NF-κB信号途径调节PCV2的复制。试验三：硒通过提高GPX1的表达阻断氧化应激对PCV2复制的促进作用本试验主要对PCV2复制、氧化应激以及硒之间的相互作用关系进行了研究。通过测定PCV2的DNA拷贝数和PCV2阳性感染的细胞数发现,过氧化氢诱导的氧化应激能够促进PCV2的复制；高剂量的硒蛋氨酸(6gM)能够抑制PCV2的复制；而生理剂量的硒蛋氨酸(2或4μM)则能够阻断氧化应激对PCV2复制的促进作用；PCV2感染PK15细胞后GPX1活性下降,但GPX1mRNA水平却在PCV2感染后显著升高,该结果预示在PCV2感染过程中GPX1可能对宿主细胞起到重要的保护作用。对GPX1进行RNA干扰后发现,硒蛋氨酸对氧化应激促进PCV2复制的阻断作用下降了,其表现与GPX1被干扰后硒蛋氨酸对GPX1表达的影响相一致,从而说明在硒阻断氧化应激促进PCV2复制的过程中,GPX1起着至关重要的作用。本试验研究结果提示,PCV2感染后所导致的不同猪场发病率和死亡率的差异可能与氧化应激有关,而硒则具有预防控制PCV2感染的潜力。试验四：硒对PCV2感染阳性猪场断奶仔猪生长性能、抗氧化性能及PCV2感染的影响从江苏某PCV2感染阳性猪场选择断奶仔猪60头,随机分成5组,每组3个重复,每个重复4头,对照组饲喂基础日粮,试验组分别饲喂基础日粮+亚硒酸钠或富硒酵母,其中每种硒的添加浓度均为0.3和0.6mg/kg。试验结果表明,饲粮中添加不同形式不同水平的硒均可显著改善饲料的报酬率,提高断奶仔猪的日增重,降低料肉比；加硒提高了断奶仔猪血清中的GPX和SOD活性,降低了血清中的MDA含量,提高其抗氧化性能；加硒增加了血液中GPx1、GPx4、TR1等硒蛋白的mRNA水平。此外,添加不同浓度的亚硒酸钠或富硒酵母均能够显著降低PCV2感染阳性猪场断奶仔猪血液中的PCV2DNA拷贝数。从改善机体抗氧化性能、提高硒蛋白mRNA水平以及抑制PCV2感染的效果来看,富硒酵母优于亚硒酸钠。试验五：硒对PCV2感染阳性猪场断奶仔猪免疫机能的影响从江苏某PCV2感染阳性猪场选择断奶仔猪60头,随机分成5组,每组3个重复,每个重复4头,对照组饲喂基础日粮,试验组分别饲喂基础日粮+亚硒酸钠或富硒酵母,其中每种硒的添加浓度均为0.3和O.6mg/kg.试验结果表明,饲料中添加不同浓度的亚硒酸钠或富硒酵母均能够显著提高断奶仔猪血清细胞因子IL-2和TNF-α的含量(P<0.05)；PCV2感染仔猪外周血液淋巴细胞转化试验结果表明,添加不同浓度的亚硒酸钠或富硒酵母可以提高其淋巴细胞的增殖水平；从提高断奶仔猪免疫机能的效果来看,富硒酵母优于亚硒酸钠。