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夏枯草素有清肝明目,消肿散结之效。现代研究表明夏枯草具有抗菌抗病毒,抗炎消炎,降血糖,降血脂等作用,尤其在抗癌方面,夏枯草的治疗效果也十分显著。在临床辅助治疗恶性肿瘤上,夏枯草注射液已有十几年的历史。然而,在治疗结肠癌转移的方面,还未见报道。
本课题基于夏枯草的抗肿瘤活性,通过MTT与克隆形成实验,筛选出其中具有较高安全性的分离组分,并经鉴定为迷迭香酸(RA)。通过创伤愈合实验,粘附实验及侵袭实验,验证了迷迭香酸的确有抑制细胞运动,粘附,浸润的作用。
由于血管生成及金属酶抑制剂(MMPs)的升高是发生癌转移的初兆,所以我们将焦点聚集在血管内皮生长因子(VEGF)和MMP-2,-9上,实验结果表明,迷迭香酸抑制了VEGF的转录,而抑制了MMP-2,-9的活性及蛋白和基因的表达,可能由此抑制Ls174-T的浸润转移。
很多文献表明,迷迭香酸的作用机制与氧化应激系统密切相关,而氧化应激系统的核心转录因子为NF-κB。从实验结果可以推测,迷迭香酸是通过升高谷胱甘肽(GSH),而清除胞内的活性氧簇(ROS),最终抑制NF-κB的核转位而抑制Ls174-T的浸润转移。
最新研究表明,癌转移常依赖于细胞外信号调节激酶ERK途径,我们在上面的实验中也发现了迷迭香酸抑制了ERK途径中的转录因子NF-κB的核转位。通过Western Blotting,我们看到迷迭香酸能显著抑制丝苏氨酸激酶(Akt)、胞外信号调控激酶(ERK)的磷酸化,所以我们推测迷迭香酸部分依赖于ERK途径而抑制Ls174-T的浸润转移。
同时,我们采用改进寇氏法测定了迷迭香酸的急性毒性,结果显示RA的半数致死剂量(LD50)为169.6±32.4mg/kg,表明安全性较高。体内实验表明,RA能有效抑制肿瘤的生长,并能够显著减少肺转移灶数目,同时发现2mg/kg的RA抑制癌转移效果最为显著。我们又结合活体成像系统,使用新型荧光探针考察体内RA对荷瘤小鼠肿瘤分布的影响,结果表明RA对于肿瘤的转移有一定的抑制作用,其中2mg/kg的RA的效果也最为显著。
综上所述,夏枯草分离所得的迷迭香酸能有效抑制结肠癌的浸润转移。