夏枯草有效成分的活性筛选及抑制结肠癌细胞浸润转移的分子机理研究

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夏枯草素有清肝明目,消肿散结之效。现代研究表明夏枯草具有抗菌抗病毒,抗炎消炎,降血糖,降血脂等作用,尤其在抗癌方面,夏枯草的治疗效果也十分显著。在临床辅助治疗恶性肿瘤上,夏枯草注射液已有十几年的历史。然而,在治疗结肠癌转移的方面,还未见报道。   本课题基于夏枯草的抗肿瘤活性,通过MTT与克隆形成实验,筛选出其中具有较高安全性的分离组分,并经鉴定为迷迭香酸(RA)。通过创伤愈合实验,粘附实验及侵袭实验,验证了迷迭香酸的确有抑制细胞运动,粘附,浸润的作用。   由于血管生成及金属酶抑制剂(MMPs)的升高是发生癌转移的初兆,所以我们将焦点聚集在血管内皮生长因子(VEGF)和MMP-2,-9上,实验结果表明,迷迭香酸抑制了VEGF的转录,而抑制了MMP-2,-9的活性及蛋白和基因的表达,可能由此抑制Ls174-T的浸润转移。   很多文献表明,迷迭香酸的作用机制与氧化应激系统密切相关,而氧化应激系统的核心转录因子为NF-κB。从实验结果可以推测,迷迭香酸是通过升高谷胱甘肽(GSH),而清除胞内的活性氧簇(ROS),最终抑制NF-κB的核转位而抑制Ls174-T的浸润转移。   最新研究表明,癌转移常依赖于细胞外信号调节激酶ERK途径,我们在上面的实验中也发现了迷迭香酸抑制了ERK途径中的转录因子NF-κB的核转位。通过Western Blotting,我们看到迷迭香酸能显著抑制丝苏氨酸激酶(Akt)、胞外信号调控激酶(ERK)的磷酸化,所以我们推测迷迭香酸部分依赖于ERK途径而抑制Ls174-T的浸润转移。   同时,我们采用改进寇氏法测定了迷迭香酸的急性毒性,结果显示RA的半数致死剂量(LD50)为169.6±32.4mg/kg,表明安全性较高。体内实验表明,RA能有效抑制肿瘤的生长,并能够显著减少肺转移灶数目,同时发现2mg/kg的RA抑制癌转移效果最为显著。我们又结合活体成像系统,使用新型荧光探针考察体内RA对荷瘤小鼠肿瘤分布的影响,结果表明RA对于肿瘤的转移有一定的抑制作用,其中2mg/kg的RA的效果也最为显著。   综上所述,夏枯草分离所得的迷迭香酸能有效抑制结肠癌的浸润转移。
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