论文部分内容阅读
背景资料 应用可降解的高分子复合材料制备神经导管修复神经缺损已经成为周围神经损伤后修复的重要研究方向。神经导管一方面能使神经营养因子在导管内积聚,浓度增高,另一方面引导神经缺损两端准确对合,同时导管的植入操作简单,可以减少手术对神经的损伤。神经导管修复神经损伤的效果主要与两方面有关:一是神经导管的材料种类及理化特点;二是神经导管形成的再生微环境包括其中的体液环境、基质环境和细胞环境。对于后者,研究主要集中在神经营养因子(neurotrophic factors,NTFs),众多学者尝试将外源性NTFs引入神经导管,以期尽可能有效地促进轴突再生,但外源性NTFs导入的浓度和释放的途径仍需进一步研究,同时最有益于神经再生所必须的营养因子的数量和种类也待进一步明确。雪旺细胞(Schwann cells,SCs)是周围神经的主要结构和功能细胞,它能分泌各种神经营养因子,产浙江大学医学院硕士学位论文岔雪旺细胞充填高分子神经导管修复大鼠坐骨神经缺损的实验研究生细胞外基质和细胞勃附因子,已有许多研究确认了雪旺细胞具有显著的促进神经再生作用。与浙江大学高分子研究所共同研制的聚酷-聚碳酸酷高分子神经导管经初步的动物试验,具有良好的通透性和生物相容性及适宜的降解时间,可促进神经纤维的再生和功能修复,但其修复的质量仍较正常神经为差,将体外培养的雪旺细胞悬液填充导管内以进一步提高修复效果,具有理论上的可行性,故设计本实验,评价填充雪旺细胞的高分子材料导管修复神经缺损的效果。 研究目的 评价雪旺细胞填充高分子材料导管修复大鼠坐骨神经缺损的效果。 方法 1采用大鼠坐骨神经预变性的方法培养纯化雪旺细胞,免疫组化鉴定。 2取45只SD大鼠随机分成3组,A、B、C组各15只,切除部分右后肢坐骨神经使缺损距离在10mm一12mm之间,套上导管。A组导管内填充雪旺细胞及DMEM培养液,B组内填充DMEM培养液,C组为空导管组。 3术后观察大鼠的行走步态,并在20周处死大鼠前测定坐骨神经功能指数(Seiatie九nction index,sFx)。 4 20周时处死大鼠,观察坐骨神经生长的情况,测定神经传导速度(nerve eonductive veloeity,NCV)及肌肉湿重(包括健侧和实验浙江大学医学院硕士学位论文爸雪旺细胞充填高分子神经导管修复大鼠坐骨神经缺损的实验研究侧)o坐骨神经标本取横向及纵向截面切片,显微镜下观察神经再生的情况,并对再生神经纤维数量进行计数统计。比较A组中的健侧与实验侧的神经传导速度、肌肉湿重及神经纤维数量。 5部分标本做电镜观察髓鞘生长情况。 6数据采用SPSS10.0统计软件进行统计学分析,以P<0.05为有显著性差异。 结果 1细胞鉴定:细胞培养后经免疫组化鉴定,雪旺细胞胞体及其突起呈棕褐色,阳性细胞占细胞总数的90%。 2大体观察:饲养过程中无大鼠死亡,大鼠患肢屈曲挛缩情况及拖曳步态在4周以后有所改善。大鼠20周处死后,未见导管残留,导管桥接部分增粗,未见桥接段上下神经萎缩,周围有血管增生、粘连现象。 3坐骨神经功能指数:三组比较A组与B组、A组与C均有显著性差异(P<0 .001),B组与C组无显著性差异(P>0 .05)。 4肌肉湿重恢复率(实验侧与健侧的比值):A组与B组、A组与C相互比较有显著性差异(P<0 .01,P<0 .05,),B组与C组差异无统计学意义(P>0.05)。比较A组实验侧与健侧的肌肉湿重有显著性差异(P(0.001)。 5电生理观察:三组NCV相互比较,A组与B组、A组与C组均有显著性差异(P<0.01),B组与C组无显著性差异(P>0 .05)。比较