重组人肠三叶因子对肠上皮细胞增殖移行能力的影响及其机制研究

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目的观察重组人肠三叶因子(recombinant human intestinal trefoil factor,rhITF)对肠上皮细胞株(intestinal epithelial cells,IEC-6)增殖、移行及变形能力的影响,并探讨其可能的机制。方法将肠上皮细胞株(IEC-6)随机分为阴性对照组、正常对照组、烧伤对照组、以及不同浓度的rhITF处理组和rhITF与黏蛋白(mucin)联合用药组。采用生长曲线法、划痕机械损伤法和Transwell法分别检测IEC-6增殖、移行和变形能力的变化。将携带rhITF基因的腺病毒感染Caco-2细胞,构建rhITF高表达细胞株,采用RT-PCR和Western blot分别检测细胞黏附分子β-catenin基因表达水平和蛋白表达水平的变化。结果(1)rhITF无论是对正常IEC-6还是烧伤血清致伤的IEC-6均无促增殖作用;(2)rhITF对正常IEC-6和烧伤血清损伤的IEC-6均具有明显的促进移行作用,并具有时间和剂量依赖性;联合mucin应用其促移行作用增强(。3)rhITF能显著增强正常IEC-6和烧伤血清损伤的IEC-6的变形能力,并具有时间和剂量依赖性。mucin的作用不明显,但能明显增强rhITF的生物学效应,表现为最小有效剂量降低和有效时间延长。(4)rhITF作用Caco-2细胞24h后能明显抑制黏附分子β-catenin基因表达和蛋白合成。(5)高表达rhITF的Caco-2细胞其β-catenin基因和蛋白水平均明显下降。结论rhITF对细胞增殖无明显作用,但能明显改善细胞变形能力,促进细胞移行。单独使用黏蛋白对细胞移行无明显影响,但能显著增强rhITF的生物学效应。无论是使用外源性rhITF还是利用基因转染方式增加rhITF的表达均能明显抑制黏附分子β-catenin的基因表达和蛋白合成,降低细胞间黏附力,促进细胞移行。
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