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口蹄疫(foot-and-mouth diseases,FMD)是由口蹄疫病毒(foot-and-mouth diseases virus,FMDV)引起的危害猪、牛、羊等偶蹄动物的重大动物传染病。在临床诊断中,早期、快速、准确地检测FMDV感染对于防控FMD的大流行来说是至关重要的。化学发光免疫分析(chemiluminiscence immunoassay,CLIA)作为最新的标记检测技术,由于其具有极高的敏感性、信噪比以及宽的线性范围而在诊断艾滋病、肝炎、肿瘤等领域广泛应用。目前关于诊断FMD的CLIA方法还未见报道。本研究利用原核表达系统成功表达了FMDV的非结构全长蛋白3ABC、2C和五株位于3A、3B上的单表位蛋白分别命名为3Aepi1、3Aepi2、3Bepi1、3Bepi2、3Bepi3。其中,3ABC和2C蛋白以包涵体的形式表达,五株单表位蛋白以可溶性的形式表达。利用亲和层析等层析技术实现了对上述蛋白的高通量纯化。Western blot结果显示,纯化后的所有蛋白都能和FMDV感染阳性血清反应。间接ELISA结果表明3ABC、2C、3Bepi1、3Bepi2蛋白具有良好地区分FMDV感染阳性血清和阴性血清的能力。分别将单独的3ABC蛋白和混合的3ABC和2C蛋白作为包被抗原成功建立了两种检测猪FMDV感染的CLIA方法,即猪-3ABC-CLIA和猪-3ABC-2C-CLIA。通过检测712份已知FMD背景的猪血清表明猪-3ABC-2C-CLIA(诊断敏感性为100%,诊断特异性为96.47%)的准确性要明显高于猪-3ABC-CLIA(诊断敏感性为95.73%,诊断特异性为95.87%)。通过对田间962份样品的检测表明猪-3ABC-2C-CLIA与国产商品化ELISA试剂盒的符合率为96.15%,与进口商品化试剂盒的符合率为97.81%。通过对感染FMDV的猪进行血清学监测表明,在通常情况下,各商品化ELISA试剂盒最早可以在感染后的6d-9d判定猪感染了FMDV,相比之下,猪-3ABC-2C-CLIA在感染后的1d-4d即可判定猪感染FMDV。此外,该CLIA方法具有检测快速的优点,可在15min内完成检测,并具有良好的重复性与稳定性。在此基础上,成功建立了检测牛口蹄疫非结构蛋白抗体的CLIA方法即牛-3ABC-2C-CLIA。通过检测460份已知FMD背景的牛血清表明该方法诊断敏感性为96.86%、诊断特异性为93.38%。通过对田间810份随机样品的检测表明该CLIA方法与国产ELISA试剂盒的符合率为91.85%与进口ELISA试剂盒的符合率为92.83%。此外该方法可在25min内完成检测。因此,我们首次研发成功了能够快速并敏感地同时检测口蹄疫3ABC、2C非结构蛋白抗体的化学发光免疫分析诊断试剂盒。