扎托布洛芬是一种强效的非甾体抗炎药，用于治疗慢性风湿性关节炎、变形性关节症、肩周炎、胫肩腕综合症以及术后等的消炎镇痛。扎托布洛芬由日本化学制药公司开发，尚未在我国批准上市。目前尚无扎托布洛芬片在中国人体药代动力学特征的报道，本研究严格遵循“化学药物临床药代动力学研究技术指导原则”以及“2010版药典二部附录”的规定进行试验设计。本研究建立了高效液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）检测人血浆和尿液中扎托布洛芬浓度的方法，并将该方法应用于单次及多次给药后扎托布洛芬在血浆及尿液中浓度的测定，首次全面、系统的阐明扎托布洛芬在中国健康受试者中药代动力学特征，探讨扎托布洛芬在人体内的吸收、分布、代谢和排泄特点，阐明其动态变化规律，确定扎托布洛芬片的给药剂量，为Ⅱ期临床试验研究设计提供参考依据，并且评价扎托布洛芬的安全性。本研究主要从以下方面获得具有科学意义和应用价值的研究成果。1.扎托布洛芬分析测定方法的建立目的：建立灵敏度高、重复性好、专属性强的LC-MS/MS检测血浆和尿液中扎托布洛芬的方法。方法：采用Agilent ZORBAX Eclipse Plus-C18column（150mm×4.6mm,5μm）柱，流动相为：甲醇：水（0.1%甲酸）=90：10（V:V），地西泮为内标，以多反应监测（MRM）扫描方式进行监测，监测离子质荷比：扎托布洛芬m/z299.2→m/z225.2，地西泮m/z285.1→m/z193.1，血浆和尿液样品经乙腈沉淀蛋白后取上清液进样。结果：本文建立了LC-MS/MS法测定人血浆中和尿液中扎托布洛芬浓度的方法操作简单，分析时间缩短。血浆中扎托布洛芬线性范围为0.02-20μg·mL^-1，最低定量限为0.02μg·mL^-1，低、中、高三种浓度批内和批间精密度RSD均小于15%，绝对回收率>85%；尿液中扎托布洛芬线性范围为：0.1-50μg·mL^-1，最低定量限为0.1μg·mL^-1，低、中、高三种浓度批内和批间精密度RSD均小于15%，绝对回收率>95%；介质效应测定结果和稳定性考察结果均符合生物样品测定要求。结论：所建方法灵敏度高、重复性好、专属性强，适用于人血浆中和尿液中扎托布洛芬的测定。2.扎托布洛芬单次药代动力学研究目的：进行扎托布洛芬单次给药药代动力学研究，测定血浆中和尿液中扎托布洛芬浓度，评价药物在健康人体内吸收、分布和消除特点。方法：30名健康受试者随机平行分为低、中、高3组，每组10名（男女各半），分别单次口服80mg、160mg、240mg扎托布洛芬片，于给药前0h和给药后0.5，0.75，1.0，1.5，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，8.0，10.0，12.0，24.0h，分别采血4mL，置于肝素抗凝管中，以16000r·min-1离心10min，上层血浆置普通干燥试管中，于-80℃保存，待测。同时收集受试者服药前和服药后0-4h，4-8h，8-12h，12-24h尿样，记录体积，留取10mL，放入-80℃冷冻保存。受试者给药前排空膀胱。用LC-MS/MS法测定血浆和尿液样品中扎托布洛芬浓度，用WinNonlin6.2软件计算药动学参数。结果：30名健康受试者单次给予扎托布洛芬（80mg、160mg、240mg）后，其体内扎托布洛芬主要的药代动力学参数分别为：Tmax：1.95±0.56h、2.05±0.50h、2.10±0.46h；C_max：6.63±0.90g·mL^-1、12.48±1.57g·mL^-1、17.82±2.01g·mL^-1；t1/2：4.03±1.37h、4.05±1.38h、4.18±1.61h； AUC0-t：25.50±7.55g·h·mL^-1、49.43±5.21g·h·mL^-1、72.42±12.39g·h·mL^-1；0-24h的尿累积排泄率为：20.35±2.13%，22.07±3.60%，23.19±4.15%。结论：单次给药低、中、高三个剂量组血浆中扎托布洛芬C_max和AUC_0-24与剂量呈线性相关，r>0.9，表明扎托布洛芬在80-240mg内为线性代谢。3.扎托布洛芬多次药代动力学研究目的：开展扎托布洛芬多次给药药代动力学研究，测定血浆中扎托布洛芬浓度，评价药物在多次服药后的吸收、分布和消除特点，及是否存在蓄积现象，为Ⅱ期临床推荐合适的给药方案。方法：单次给药试验结束后，低剂量组10名健康受试者继续进行多次给药试验，每次给药量为80mg，每日3次，连续给药6天。多次给药的采血时间点为：第3～5天早上给药前，第6天早给药前和给药后0.5，0.75，1.0，1.5，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，8.0，10.0，12.0，24.0h。分别采血4mL，置于肝素管中，以16000r·min^-1离心10min，上层血浆置-80℃储藏，待测。用LC-MS/MS法测定血浆样品中的扎托布洛芬浓度，用WinNonlin6.2软件计算药动学参数。结果：10名健康受试者多次给予扎托布洛芬片（80mg）后，扎托布洛芬的药代动力学参数：Tmax：1.7±0.59h；C_max：6.45±0.98g·mL^-1；Cmin：0.60±0.19g·mL^-1；Cav：2.74±0.35g·mL^-1；t1/2：4.13±1.83h； AUC0-t：26.34±3.83g·h·mL^-1；AUCss：21.94±2.76g·h·mL^-1。蓄积因子为：0.99±0.32。结论：多次服药后药代动力学特征与单次服药后相似，Tmax、t1/2和AUC0-t等参数无统计学差异。扎托布洛芬在体内无蓄积，表明多次给药扎托布洛芬片（80mg）是安全的。4.扎托布洛芬相对生物利用度研究目的：研究单次给药后扎托布洛芬胶囊（受试制剂，T）和扎托布洛芬片（参比制剂，R）的的相对生物利用度，并对其进行生物等效性评价。方法：采用单次、随机、二阶段交叉设计自身对照试验方法，按照试验方案将入选20名男性健康受试者，按1：1随机分为两组，分别单次口服160mg受试制剂或参比制剂；经一周清洗期后，两组交换服药品种进行第二阶段试验。采血点同药代动力学研究。结果：受试者服用受试制剂T和参比制剂R后扎托布洛芬的主要药代动力学参数如下所示：Tmax：1.90±0.60h、2.20±0.50h；Cmax：12.52±2.08g·mL^-1、12.92±2.60g·mL^-1；t1/2：3.92±2.46h、3.96±1.56h； AUC0-t：55.45±12.20g·h·mL^-1、55.45±11.86g·h·mL^-1；AUC0-∞：56.63±16.66g·h·mL^-1、56.60±13.10g·h·mL^-1。药动学参数Cmax，AUC0-t和AUC0-∞对数转换后90%置信区间分别为：89.9-106.2%,94.3-103.8%，94.5-103.6%（P>0.05）。整个试验过程未发生不良反应事件。结论：该中国健康男性健康受试者生物等效性研究中，受试者单次口服受试制剂（扎托布洛芬胶囊）和参比制剂（扎托布洛芬片），根据中国药品食品监督管理局规定，两种制剂生物等效，且耐受性良好。