【摘 要】
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埃立克体病(Ehlichiosis)是一类以热带和亚热带为主分布的人兽共患病。该病的病原体为埃立克体(Ehrlichia)。埃立克体是一类专性白细胞内寄生的革兰氏阴性小球菌,蜱是其主要传
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埃立克体病(Ehlichiosis)是一类以热带和亚热带为主分布的人兽共患病。该病的病原体为埃立克体(Ehrlichia)。埃立克体是一类专性白细胞内寄生的革兰氏阴性小球菌,蜱是其主要传播媒介。本研究旨在建立一套快速、敏感、特异的PCR和序列分析方法,从我国广泛分布的微小牛蜱(Boophilus micropus)及其它蜱种样本中检测埃立克体病原体,研究埃立克体在我国自然界的分布,为我国埃立克体病的防治奠定基础。本研究依据蜱传埃立克体16S rDNA序列设计引物,建立一种高敏感和具有埃立克体属特异性的套式PCR。研究证明该套式PCR的敏感性和特异性均优于常规PCR,以之检测采集于西藏、四川、东北等地区的蜱,结果西藏某地的43组微小牛蜱DNA样本中有17组(37%)扩增出阳性片段,四川某地的44组微小牛蜱、东北某地的46组全沟硬蜱、38组森林革蜱、32组日本血蜱样本扩增均为阴性。对阳性蜱DNA样本中的埃立克体16S rDNA的5’末端片段(~450bp)进行克隆和测序,得到两种序列,一种与边缘无形体16S rDNA完全一致,另一种与查菲埃立克体16S rDNA最相似。根据测得的序列设计种特异性引物,用PCR扩增到类查菲埃立克体的完整16S rRNA基因并测定了它的序列。用DNAsis软件包对该序列和相关细菌的16S rDNA序列进行同源位排列和对比分析,以及依据序列相似程度构建进化树,结果显示该埃立克体属于埃立克体属的犬埃立克体群,与查菲埃立克体最相关(16S rRNA基因的相似水平为97.6%)。<WP=7>本研究表明,西藏某地的微小牛蜱携带有类查菲埃立克体和边缘无形体,该类查菲埃立克体可能是一个埃立克体新种(西藏埃立克体Ehrlichia sp. Tibet);本研究说明该地区存在埃立克体病的自然疫源地,可能有人兽埃立克体病流行。
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