油茶桑寄生多糖的提取纯化、结构分析及其生物活性研究

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多糖是营养素的重要组成部分,在自然界中广泛存在,包括植物、动物以及微生物,其中植物多糖因具有低毒性、高生物相容性、高生物降解性和广泛的生物学活性成为目前的研究热点。桑寄生的研究目前多集中于对黄酮以及凝集素的研究,对桑寄生多糖的研究目前主要集中在红花桑寄生和椆树桑寄生,对油茶桑寄生多糖的研究鲜见文献报道。本研究旨在对油茶桑寄生多糖进行提取分离、纯化,以获得油茶桑寄生多糖均一组分,并对油茶桑寄生粗多糖及其均一组分进行结构分析和生物活性评价,期望为油茶桑寄生多糖的开发与利用提供实验依据。以蒸馏水、盐酸溶液以及氢氧化钠溶液为溶剂从油茶桑寄生的中提取得到六种粗多糖、随后经DEAE-Sephadex-25离子交换柱分离纯化,纯化多糖再经Sephadex G-100凝胶柱层析以及紫外光谱进行纯度鉴定,获得十一种均一组分多糖。分别采用苯酚-硫酸法、间羟基联苯法以及考马斯亮蓝法检测以上十七种多糖的总糖含量、糖醛酸含量以及蛋白质含量。十七种多糖的单糖组成以及平均分子量通过气相色谱法(GC)、凝胶渗透色谱法(GPC)测得;通过红外光谱法(IR)、紫外光谱法(UV)、刚果红实验检测十七种多糖的主要结构信息;通过ABTS、DPPH自由基清除实验检测十七种多糖的体外抗氧化能力,通过APTT、TT、PT,检测十七种多糖的体外抗凝血活性,探讨提取部位、提取溶剂、多糖结构与体外抗氧化及抗凝血生物活性之间的关系。结果表明:(1)十七种多糖的总糖、糖醛酸以及蛋白质的含量各不相同。(2)十七种多糖大多由核糖(Rib)、鼠李糖(Rha)、阿拉伯糖(Ara)、甘露糖(Man)、葡萄糖(Glc)以及半乳糖(Gal)构成,其摩尔比各不相同;(3)十七种多糖的分子量不相同,以氢氧化钠溶液为溶剂提取得到的多糖分子量较小;(4)红外光谱显示提取得到的十七种多糖中十一种为β构型的吡喃环多糖,六种为α构型的吡喃环多糖;(5)生物活性实验结果表明十七种多糖具有体外清除自由基及抗凝血活性,以氢氧化钠溶液为溶剂提取的油茶桑寄生叶粗多糖及其纯化均一组分多糖清除ABTS自由基的效价最高,其IC50约为20 mg/L;十七种多糖主要以内源性凝血途径发挥抗凝血活性,以氢氧化钠溶液为溶剂提取的油茶桑寄生多糖的抗凝血、抗氧化活性较好,可能与其β构型、分子量较小、以及半乳糖、葡萄糖含量较高等因素有关。通过对油茶桑寄生多糖的研究,可以预见油茶桑寄生的药用价值,本研究有望为油茶桑寄生多糖开发提供实验依据。
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