工作目的:X染色体连锁的肾上腺脑白质营养不良是由X染色体上ABCD1基因突变引起的严重的神经系统疾病,目前尚未存在可以治愈该疾病的方法和药物。基因治疗可能是一种有希望的持久治疗该疾病的方法,慢病毒载体作为一种转染工具,对神经元细胞的转染效率很高,因此,我们采用慢病毒载体携带的人类ABCD1基因直接注射进入小鼠脑部,进行了系统性的评价和比较。研究方法:在本研究中,我们首先设计了携带人源ABCD1基因的慢病毒载体,然后利用体外转染实验进行了细胞层次的安全评估,对细胞的载体拷贝数和ABCD1蛋白表达量进行了评估。然后将慢病毒载体注射进入到小鼠脑部,进行体内安全性评估,采用了单边注射和多位点双边脑注射两种方式方法,从而评估在慢病毒载体在小鼠脑注射后的分布情况,以及注射量对小鼠所造成的影响,进行了载体拷贝数,小鼠脑内ABCD1蛋白量的评估。成果和结论:在细胞层次的实验中转染了慢病毒载体的病人细胞得到了ABCD1蛋白的表达,未出现细胞毒性等相关问题,生长正常,而非病人细胞则出现了ABCD1蛋白的过表达情况,但细胞形态正常,生长状态与未转染细胞无差异。而在体内实验中,我们发现注射慢病毒载体携带人类ABCD1到小鼠脑部可以在整个大脑区域表达,且小鼠在注射后的活动力,行为学和体重等方面都很正常,小鼠牺牲后进行检测,未发现神经炎症和多种类型的神经元细胞的异常等相关问题。此外,我们发现慢病毒可通过神经细胞向对侧大脑显著迁移,从而扩大慢病毒载体的分布,过表达ABCD1蛋白,但无炎症反应和其他异常情况出现。最后,我们确定了慢病毒载体脑内注射正常小鼠有效可行性和安全性,与未注射慢病毒载体的小鼠相比,注射后小鼠脑中的过量ABCD1表达不会影响小鼠的生命活动和行为学,体重正常。这些结果支持了脑内慢病毒基因治疗神经系统疾病的安全性和可行性,并为肾上腺脑白质营养不良患者提供了一种潜在的、有前途的治疗策略。