实验目的 选用几丁糖作为关节软骨细胞体外培养支架，并用卵磷脂及多聚赖氨酸包埋，同时选用TGF-β₁调节软骨细胞生长，探索二者对体外培养的关节软骨细胞的作用，为关节软骨缺损的修复提供实验依据。 实验方法 无菌条件下分离4周龄日本大耳白兔的膝关节，切取关节透明软骨，剪成约0.5-1mm³大小碎块，Ⅱ型胶原酶消化3.5-4小时，吹打，离心，清洗，反复消化3次，收集关节软骨细胞，以4.8×10⁶/ml种植于培养瓶，加入DMEM培养液4ml，于培养箱内培养。当细胞生长至约90％融合时，胰蛋白酶消化，传代，收集第一代软骨细胞，制成细胞悬液，浓度为4.5×10⁷/ml。将第一代软骨细胞悬液100μl滴加到卵磷脂及多聚赖氨酸包埋后的几丁糖支架上，培养箱内静置4小时后，加入DMEM培养液100μl，96孔板内培养，每日换液。实验组加入TGF-β₁（10ng/ml），对照组不加入TGF-β₁。观测指标：（1）大体及倒置显微镜观察、（2）组织学观察、（3）Ⅱ型胶原免疫组化检测、（4）扫描电镜观察、（5）细胞含量MTT测定、（6）统计学分析。 实验结果 加入细胞悬液后悬液呈球型附在支架表面，然后迅速扩散到支架内，表明支架有较强的亲水性。晃动培养板细胞无漂动，散落在培养孔底部的细胞较少，表明支架对细胞有较强的粘附力。细胞呈圆形、类圆形附于支架上，支架周缘有絮状、纤维条索状胶原基质生成，随着培养时间的延长，大多数细胞轮廓不清，有清晰基质陷窝形成。4周时，支架复合物外观保持原形无塌陷。 HE染色显示几丁质支架红染。支架表面为数层多角形细胞。支架内部细胞大部呈圆形或多角形，细胞间有呈絮状淡染的基质，胞浆淡紫染，胞核蓝紫深染。随着培养时间的延长，细胞量逐渐增多，通过呈絮状淡染的基质紧密连接成一体。实验组细胞数及基质分泌量明显多于对照组。 细胞周围及胞浆内n型胶原均呈阳性，染成棕黄色。随着培养时间的延长，阳性逐渐增强。相同时相点，实验组阳性表现明显强于对照组。 扫描电镜下见几丁糖支架表面粗糙不平，呈沟壑状，有裂隙及裂孔。软骨细胞呈球形或多角形单个或团状粘附在支架表面，细胞表面有突起的伪足和分泌的基质。第4周时明显可见细胞被包埋在其所分泌的基质中，通过基质相互连接成一个整体。 不同时间组间及组内吸光密度值（OD）之间的差异有非常显著性（P<0 .01）。实验组2周与对照组4周之间的差异有显著性（P<0.05）。实验结论 卵磷脂及多聚赖氨酸包埋后的几丁糖支架亲水性和细胞粘附性较好。细胞一支架复合物中细胞周围及胞浆内n型胶原均呈阳性，随着培养时间的延长，阳性逐渐增强，说明软骨细胞于支架中生长良好。MTT检侧细胞增殖情况，结果发现包埋几丁糖支架对软骨细胞的增殖无抑制作用。本实验在细胞一支架复合物中加人TGF一p，后，细胞在支架上保持了正常的形态，生长迅速，同时分泌软骨特有n型胶原基质功能旺盛，明显优于对照组，说明TGF一日，在软骨细胞一几丁糖支架复合物的体外培养过程中具有明显促进软骨细胞增殖的作用。本实验证实了可以使用几丁糖作为软骨细胞体外培养支架，卵磷脂及多聚赖氨酸包埋几丁糖支架后，其亲水性和细胞吸附性好，对软骨细胞的增殖无抑制作用。TGF一p;在软骨细胞一几丁糖支架复合物的体外培养过程中具有明显促进软骨细胞增殖的作用。