三种水草植株再生及遗传转化研究

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本研究以水生植物小对叶(Bacopa monnieri)、红波(Alternanthera bettzickiana)、金钱草(Lysima chiachristinae Hance)为试验材料,建立了三种水草的组织培养再生体系及根癌农杆菌介导的小对叶遗传转化体系。主要结果概述如下:(1)通过研究不同生长调节剂的浓度配比对小对叶愈伤组织、不定芽和根诱导的影响,筛选出诱导愈伤组织、不定芽和根的最佳培养基,优化了小对叶再生体系。试验结果表明:小对叶叶盘在MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.02mg/L培养基上的诱导率和生长状态都最好,是小对叶愈伤组织诱导和增殖的最佳选择。愈伤组织在分化培养基MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L上的诱导率最高,长势最好,分化率可达100%。小对叶的壮苗培养基为MS+6-BA0.5mg/L。再生芽在培养基1/2MS+IBA0.1mg/L上生根率可达100%。(2)红波:以叶片为外植体,愈伤组织诱导采用MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L的培养基,芽诱导采用MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.05mg/L+AD10mg/L的培养基,茎尖芽诱导采用MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.05mg/L培养基,继代培养采用MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.05mg/L的培养基,根诱导采用1/2MS+IBA0.5mg/L的培养基。金钱草:以茎尖为外植体,芽诱导采用MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.02mg/L的培养基,继代培养用MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L的培养基,根诱导采用1/2MS+IBA0.5mg/L的培养基。(3)根癌农杆菌介导小对叶转化最佳条件的确定。试验结果表明:叶盘预培养2d、OD600为0.5、侵染7min、共培养4d和延迟筛选7d时,小对叶遗传转化率最高。(4)转基因小对叶的PCR检测。经抗性筛选得到的转基因苗,通过PCR扩增,部分转基因植株中检测出有目的基因存在,说明已将目的基因成功插入到小对叶的基因组中并表达。其转化率为21.43%。
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