共振瑞利散射技术测定氟喹诺酮类抗生素的新方法研究

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共振瑞利散射(RRS)是二十世纪九十年代发展起来的一种新分析技术,由于其简便性、高灵敏性而受到人们的广泛关注。目前,共振瑞利散射已经越来越来多地应用于生物大分子、无机离子和药物的研究和测定,在纳米微粒的研究方面业取得了积极的进展。近年来,RRS技术在药物分析中的研究和应用日益增多,显示了良好的应用前景,但目前对于氟喹诺酮类抗生素的分析应用研究不多。故本文以临床上广泛使用的氟喹诺酮类抗生素作为研究对象,重点研究了这类抗生素与某些染料、金属离子的相互作用以及金属-药物螯合物与某些小分子(如染料)形成三元配合物对RRS光谱的影响。考察了适宜的反应条件,影响因素和分析化学特性,提出了一系列RRS技术测定氟喹诺酮类药物的方法,并结合吸收光谱、荧光光谱的变化和量子化学计算的方法,对相关的反应机理和RRS增强的原因进行了讨论。1、以赤藓红作探针三种方法测定氟喹诺酮类抗生素用分光光度法、荧光光度法和共振瑞利散射(RRS)法研究了环丙沙星(CIP),诺氟沙星(NOR),左氧氟沙星(LEV)和洛美沙星(LOM)四种氟喹诺酮类抗生素与酸性染料赤藓红(Ery)的相互作用,结果表明四种药物与赤藓红形成离子缔合物时,不仅引起吸收光谱的变化和荧光猝灭,也导致RRS的显著增强并产生新的RRS光谱。文中研究了结合产物的吸收、荧光和RRS光谱特征,适宜的反应条件及分析化学性质,据此发展了以赤藓红为光谱探针的灵敏、简便、快速测定氟喹诺酮类抗生素的新方法。CIP-Ery、NOR-Ery、LEV-Ery和LOM-Ery体系的RRS法检出限分别0.0172、0.0179、0.0142和0.0272μg·mL-1;荧光猝灭法的检出限分别为0.0219、0.1001、0.0361和0.0380μg·mL-1;分光光度法的检出限分别为0.0983、0.2647、0.1050和0.0970μg·mL-1。本文还研究了赤藓红与氟喹诺酮类抗生素相互作用对吸收、荧光和RRS光谱的影响。并采用量子化学AM1法计算了反应前后体系的电荷分布、生成焓和平均极化率的变化,讨论了RRS光谱产生和增强的原因及光吸收、荧光和RRS之间的能量转换关系。研究了诺氟沙星(NOR)、环丙沙星(CIP)、氧氟沙星(OF)、左氧氟沙星(LEV)、洛美沙星(LOM)和司帕沙星(SPA)等氟喹诺酮类抗生素与酸性呫吨染料赤藓红(Ery)的相互作用对于共振瑞利散射(RRS)的影响。结果表明:在pH4.4~4.6的BR缓冲介质中,上述FLQs与Ery反应,形成结合产物时,能引起RRS的明显增强,并且在一定范围内散射增强(ΔI)与赤藓红的浓度成正比,可用于赤藓红的定量测定。其中以司帕沙星(SPA)体系最灵敏,对于Ery的检出限为7.14ng·mL-1本文研究了反应体系的RRS光谱特征,并以SPA体系为例,研究适宜的反应条件和影响因素,实验了共存物质的影响,表明方法有较好的选择性。基于FLQs与Ery的离子缔合反应,发展了一种用RRS技术测定赤藓红的新方法。方法灵敏、简便、快速,可用于某些糖果和饮料中赤藓红的测定。文中还结合吸收光谱、荧光光谱及量子化学计算方法对反应机理进行了讨论。2.2、以氟喹诺酮类抗生素作探针荧光猝灭法测定赤藓红研究了诺氟沙星(NOR)、环丙沙星(CIP)、氧氟沙星(OF)、左氧氟沙星(LEV)、洛美沙星(LOM)和司帕沙星(SPA)等氟喹诺酮类抗生素与赤藓红(Ery)相互作用对荧光光谱的影响,结果表明:在弱酸性介质中,这类药物与赤藓红反应形成离子缔合物时,将引起溶液荧光猝灭。当以氟喹诺酮类抗生素作探针时,可用荧光猝灭法测定赤藓红,不同药物体系对于赤藓红的灵敏度存在差异,其检出限在0.016~0.027μg·mL-1之间,其灵敏度的顺序是LEV>LOM>CIP>NOR>OF>>SPA,即以LEV-Ery体系最好,而以SPA-Ery体系最差。本文以LEV-Ery体系为例,研究了适宜的反应条件和影响因素,考察了共存物质的影响,表明方法有较好的选择性,可用于食品中赤藓红的测定。文章还运用量子化学计算方法对反应机理进行了讨论。3、铈(Ⅳ)-氟喹诺酮类抗生素体系在pH为4.0~5.0的HCl-NaAc缓冲溶液中,Ce(Ⅳ)能与环丙沙星(CIP),诺氟沙星(NOR),培氟沙星(PEN),洛美沙星(LOM)和司帕沙星(SPA)等氟喹诺酮类抗生素的反应,形成稳定的螯合物,此时导致共振瑞利散射(RRS)的显著增强,5种药物的RRS光谱特征一致,其最大散射峰位于381nm附近,并在534nm附近出现一个较小的散射峰。在一定范围内散射强度与药物的浓度成线性增强,五种药物的线性范围和检出限分别为0.006~4.000μg.mL-1和0.0019μg·mL-1(PEN)、0.008~4.000μg·mL-1和0.0023μg·mL-1(CIP)、0.009~10.000μg·mL-1和0.0028μg·mL-1(NOR)、0.018~5.000μg·mL-1和0.0053μg·mL-1(LOM)、0.0533~3.200μg·mL-1和0.0160μg·mL-1(SPA),其中培氟沙星体系灵敏度最高,而司帕沙星体系灵敏度较低。文中重点研究了反应体系的RRS光谱特征、适宜反应条件和影响因素,考察了共存物质的影响,表明方法具有较好的选择性。利用此反应发展了一种用RRS技术简单、快速、稳定、高灵敏度测定某些氟喹诺酮类抗生素的新方法,此法可用于药物制剂和鱼肉中药物的测定,结果满意。4、铜(Ⅱ)-氟喹诺酮类抗生素螯合物与赤藓红体系在pH4.2-5.0的Britton-Robinson缓冲溶液中,环丙沙星(CIP),诺氟沙星(NOR),氧氟沙星(OF),左氧氟沙星(LEV),洛美沙星(LOM)和司帕沙星(SPA)等氟喹诺酮类抗生素(FLQs)能与铜(Ⅱ)形成螯合阳离子,它们能进一步与赤藓红(Ery)阴离子通过静电引力和疏水作用形成FLQs:Cu(Ⅱ):Ery为1:1:1的离子缔合物。此时,能引起吸收光谱的变化,并发生明显的褪色作用,最大褪色波长均位于526nm处,反应具有较高的灵敏度,除NOR的摩尔吸光系数(ε)较低外,其余5种抗生素的s值均大于1.0×105L·mol-1·cm-1,而且LOM和OF体系的ε值均大于3×105L·mol-1·cm-1,而SPA的ε值高达7.22×105L·mol-1·cm-1,可用于这类药物的分光光度测定。离子缔合反应还导致赤藓红的荧光猝灭,反应也具有高灵敏度,上述6种FLQs药物的检出限在7.1~12.2 ng·mL-1之间,为荧光猝灭法测定ng.mL-1级FLQs创造了条件。离子缔合反应更能导致共振瑞利散射(RRS)的显著增强,并产生新的RRS光谱。六种药物的反应产物具有相似的光谱特征,最大散射波长均位于566 nm处,并在333 nm和287 nm处有2个较小的散射峰。在一定条件下散射增强(ΔI)与药物浓度成正比。RRS法较褪色分光光度法和荧光猝灭法具有更高的灵敏度,对不同的FLQs药物的检出限在1.7 ng·mL-1至3.1ng·mL-1之间,更适于痕量的FLQs测定。本文研究了反应产物的吸收、荧光和RRS光谱特征,适宜的反应条件及分析化学性质,结合量子化学计算方法讨论了离子缔合反应的历程及对光谱特征的影响,并研究了RRS法的选择性及分析应用。5、氟喹诺酮类抗生素与钴(Ⅱ)和刚果红体系在pH4.5-6.5的Britton-Robinson缓冲溶液中,钻(Ⅱ)与环丙沙星(CIP)、诺氟沙星(NOR)、氧氟沙星(OF)和左氧氟沙星(LEV)等氟喹诺酮类抗生素能形成螯合阳离子,它们能通过静电引力和疏水作用与刚果红阴离子反应,形成1:2:1的三元离子缔合配合物。此时将引起溶液的共振瑞利散射(RRS)显著增强,并出现新的RRS光谱。不同抗生素具有相似的光谱特征,其最大散射波长均位于560 nm处,并在382 nm和278 nm处有2个较小的散射峰。一定浓度的抗生素与散射增强(ΔI)成正比,对不同氟喹诺酮类药物的线性范围和检出限(3σ)分别是0.026-2.64μg·mL-1和7.68 ng·mL-1(CIP),0.045-3.20μg·mL-1和13.00 ng·mL-1(NOR),0.037-4.00μg·mL-1和11.24 ng·mL-1(OF),0.039-4.00μg·mL-1和11.80 ng·mL-1(LEV),据此提出了一种以RRS技术测定氟喹诺酮抗生素的新方法。方法不仅灵敏度高,而且简单、快速,并有良好的选择性和重复性,可用于片剂、针剂、滴眼液和人尿液中氟喹诺酮类药物的测定。文中还对反应机理和RRS增强的原因作了讨论。
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