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葡萄糖氧化酶(GOX)和辣根过氧化物酶(HRP)是常用的两种酶,前者多提取自黑曲霉发酵产物,而后者则来自天然植物辣根,两种酶在很多领域都有极为广泛的应用。本文对这两种酶的共固定化条件以及共固定化酶的性质进行了研究,并对共固定化酶(HRP是主酶, GOX提供H2O2是辅助酶)催化苯甲硫醚不对称氧化成苯甲亚砜的反应展开了研究。主要的实验结果如下:(1)共固定的研究。选定了D380大孔阴离子交换树脂和聚氨酯泡沫为固定化载体,采用共价结合法将双酶共固定于两种载体。最终D380固定化酶的总酶活力可达到56 U·g-1(载体),固定化酶活得率为13%;聚氨酯泡沫固定化酶的固定化酶活得率为44%,酶活力为313 U·g-1(载体)。(2)酶学性质的研究。两种共固定酶的最适pH都为7.0,pH稳定性比游离酶得到了提高;固定化酶有较好的操作稳定性,经历10次操作后,D380固定化酶仍保留79.1%的活性,而聚氨酯泡沫固定化酶则为87.4%;两种固定化酶的最适温度为45℃,与25℃相比相对酶活力分别达到了132%和141%;固定化酶的热力学稳定性也得到了提高。(3)手性苯甲亚砜的合成。两种固定化酶用于水-有机共溶体系将苯甲硫醚的选择性氧化苯甲亚砜的研究结果表明,该反应的产物(S)-苯甲亚砜对映体过量;游离酶无论在产物得率还是在产物ee值上都比固定化酶逊色不少;有机共溶剂以叔丁醇效果最好;苯甲硫醚的最适浓度为2.0 mM,葡萄糖最适浓度为5 mM;聚氨酯泡沫固定化酶的最适温度为35℃,D380树脂固定化酶为30℃;搅拌(或摇床)转速聚氨酯泡沫固定化酶和D380树脂固定化酶分别取160rpm和140 rpm;最终,D380树脂固定化酶产物得率和ee值分别为93%和58%,聚氨酯泡沫固定化酶为89%和52%;以辛基葡萄糖代替葡萄糖被证明是可行的,但是有待进一步的研究。