冠突散囊菌与木霉混合发酵液乙醇提取物免疫调节活性的研究

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冠突散囊菌(Eurotiunm cristatum)是常见的益生菌,具有良好的抗氧化、抑制肿瘤细胞增长、抗菌、免疫调节等作用。冠突散囊菌良好的药理活性是不容忽视的,但有关免疫调节方向的研究还有待深入。本研究通过将冠突散囊菌(Eurotiunm cristatum)与其生长条件相似的几种真菌进行混合发酵,筛选出冠突散囊菌与木霉(Trichderma sp.)的混合发酵液对巨噬细胞有良好的激活作用,分离活性部位进行分析鉴定,比较其免疫活性并对活性成分进行网络药理分析,本研究的主要结果有:1.本研究将从不同地域土壤来源真菌与冠突散囊菌混合发酵的发酵液作用于RAW264.7细胞中,结果表明冠突散囊菌与木霉混合发酵液具有良好的增殖RAW264.7作用,当木霉与冠突散囊菌混合发酵第8天时效果最好,对RAW264.7细胞的增殖率达59.51%。2.冠突散囊菌与木霉混合发酵液70%乙醇提取部位对RAW264.7细胞具有良好的增殖活性,当冠突散囊菌与木霉混合发酵液70%乙醇提取物浓度为200μg/m L时,增殖率能够达到47.39%。3.使用分光光度计比色法和液相色谱-质谱联用技术对冠突散囊菌与木霉混合发酵液70%乙醇提取部位所含有化学成分进行分析,其中含有糖类0.13 mg/g,蛋白质0.04 mg/g,总多酚31.41μg/g,总黄酮0.03μg/g。检测到的化合物组分共有97种,其中芥子碱,大黄素,麦芽酚,新绿原酸等化合物具有较强的生物活性。4.冠突散囊菌与木霉混合发酵液70%乙醇提取部位进行免疫调节能力的检测,得到当对冠突散囊菌与木霉混合发酵液70%乙醇提取物为500μg/m L时,对RAW264.7细胞分泌NO量达到3.19μM,吞噬中性红的能力较空白对照组提升15.51%,分泌TNF-α的能力较LPS阳性对照组减少21.76%,分泌IL-6的能力较LPS阳性对照组少15.7%,表达相关m RNA的水平相较正常对照组有显著提升。5.利用网络药理学手段对冠突散囊菌与木霉混合发酵液70%乙醇提取物的潜在活性成分进行分析,发现L-(-)-苹果酸,柠檬酸,2-羟基肉桂酸,麦芽酚,甘氨酸,烟酸,5-羟甲基糠醛,尿嘧啶可能有一定的药理活性,并通过潜在靶点ESR2、PPARA、ACHE、MMP13、MMP8、CHRM1在类固醇激素受体活性、胶原结合、药物结合、细胞外基质分解,胆碱能突触等生物过程中发挥作用。
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