本论文是本实验室用大肠杆菌表达重组人肿瘤坏死因子的中试生产工艺的一部分。论文重点对重组人肿瘤坏死因子的基因鉴定、克隆表达，目标蛋白的释放和初提取进行了研究。 由于本实验室的E. Coli BL 21菌种保存时间过长，需要对质粒进行鉴定。首先提取pTNF320质粒，切下其中的TNF cDNA片段，插入到克隆载体pUC19上测序，根据测序结果翻译到氨基酸序列，同文献中的TNF氨基酸序列进行了比较，两者序列完全一致，表明此工程菌可用，然后将pTNF320质粒转化新鲜的宿主菌E. Coli BL21进行目标产物的表达。 将发酵产物处理后，发现以pTNF320为载体表达目标产物的表达量和活性都不是很高。因此本文尝试将TNF cDNA克隆到载体pET-21a上，构建了新的表达载体pET／TNF，实验结果表明细胞产量与原表达系统持平，但蛋白浓度及活性均有上升。 由于发酵量较大，本文中TNF的初提取采用珠磨破碎的方式．参考文献中珠磨破碎大肠杆菌的条件，设计了含有进料流量、搅拌转速和湿细胞浓度三个因素两个水平的正交实验，根据释放出的蛋白浓度、总的生物活性和比活，确立了珠磨破碎的最佳条件。 另外，本实验针对珠磨破碎动力学进行了研究，分别考察了间歇破碎、连续破碎动力学，研究了蛋白释放率与细胞破碎之间的关系，比较了连续破碎、间歇破碎及超声破碎的破碎效果。论文还研究了高流量多循环对细胞破效果的影响，考察了不同操作条件下的能量利用率。 最后根据TNF的耐温特性，集成60℃热变性除杂蛋白及随后的硫铵沉淀，考察了不同组合集成路线对TNF初提取的影响，得出了一条最佳工艺路线。