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目的:本研究旨在前期研究基础上,通过研究银屑平颗粒对豚鼠银屑病模型全血粘度及相关细胞因子(IFN-γ、IL-10)的影响,进一步探讨银屑平颗粒治疗银屑病的可能作用机理,通过观察银屑平颗粒对角叉菜胶致大鼠足跖肿、巴豆油致小鼠耳肿胀、磷酸组胺致豚鼠局部瘙痒反应的干预作用,研究其抗炎、止痒作用。
方法:
1.银屑平颗粒对心得安诱导的豚鼠银屑病模型全血粘度及组织细胞因子(IFN-γ、IL-10)的影响:取健康豚鼠,适应性饲养3d后,按体重随机分为正常对照组、模型对照组、银屑平颗粒高、中、低剂量组、阳性对照药甲氨喋呤组、银屑灵组,每组10只。除正常对照组外,其余各组用5％心得安乳剂,均匀涂抹于豚鼠双耳背部皮肤,每耳涂抹0.1ml,早晚各一次,连续涂抹2周,豚鼠耳部角质形成细胞过度增生而出现角化过度、角化不全等症状,表示造模成功。各给药组在造模成功后开始灌胃给予相应药物,每日一次,连续两周。末次给药1 h后,用20%乌拉坦腹腔注射麻醉,腹主动脉取血3ml,用3.8%枸橼酸钠按1:9抗凝全血,测定高切、中切、低切(180.0、100.0、1.0S-1)切变率下的全血粘度。处死动物,取左耳,迅速放入液氮中冷冻,于-20℃保存,采用ELISA法测定豚鼠耳部皮损组织匀浆中细胞因子IFN-γ、IL-10含量。右耳用作病理组织学检查,各组病变程度以秩和检验进行组间比较。
2.银屑平颗粒对角叉菜胶致大鼠足跖肿的干预作用:取健康大鼠,适应性饲养,按体重随机分为模型对照组、银屑平颗粒高、中、低剂量组、阳性对照药银屑灵组,每组10只。给药前,测定大鼠右踝关节周长为基础值,各组灌胃给予相应药物,给药后30min,于每只大鼠右侧踝关节皮下注射1%角叉菜胶0.1ml,于致炎后1、2、4、6h分别各测一次踝关节周长,计算出肿胀值,比较各时间点给药组与模型对照组之间的差异,观察银屑平颗粒对角叉菜胶所致足肿胀的抑制作用。
3.银屑平颗粒对巴豆油致小鼠耳肿胀的干预作用:取健康小鼠,适应性饲养,按体重随机分为模型对照组、银屑平颗粒高、中、低剂量组、阳性对照药银屑灵组,每组10只,各组分别灌胃给予相应药物,每天1次,连续3 d,末次药后1h,以2%巴豆油涂于左耳前后两面,右耳作对照,致炎后4h将小鼠处死,沿耳廓基线剪下两耳,用不锈钢冲子在同一部位分别冲下耳片,用电子天平称重。以左右耳片的重量差为肿胀值,与模型对照组作比较,观察银屑平颗粒对巴豆油所致耳肿胀的抑制作用。
4.银屑平颗粒对磷酸组胺致豚鼠局部瘙痒反应的干预作用:取豚鼠50只。按体重随机分为空白对照组、银屑平颗粒小、中、高剂量组、阳性对照药银屑灵组。各组豚鼠右后足背部剃毛1.5 cm×1.5 cm.,各组分别灌胃给药,连续2 d。给药第3天,用粗砂纸分别擦伤剃毛处以伤及表皮有轻度渗血为度。再给药一次,给药60 min后,分别在每只豚鼠创面处滴0.01%磷酸组胺0.05 mL,此后每隔3min依0.01%,0.02%,0.03%,0.04%,0.05%……递增浓度,每次均为0.05 mL/只,直至豚鼠出现回头舔后足时,记录每只豚鼠所给予组胺的总量,以此总量为致痒阈,并比较各组动物的致痒阈。
结果:
1.银屑平颗粒对心得安诱导的豚鼠银屑病模型的影响:模型组豚鼠耳部皮肤角化增厚,表皮颗粒层消失,上皮细胞层明显增生,真皮下有炎症细胞浸润,以淋巴细胞为主。银屑平颗粒高、中、低三个剂量组豚鼠耳部皮肤上皮增生、皮下炎症等病变与模型组相比均有减轻,高、中两个剂量组作用明显。心得安诱导的豚鼠银屑病模型在高切、中切、低切变率下(180.0、100.0、1.OS-1)全血粘度较正常对照组显著增高,各给药组均可降低各切变率下的全血粘度,其中银屑平颗粒高、中、低剂量和阳性对照药银屑灵组与模型组相比有显著性差异,提示银屑平颗粒具有一定的活血化瘀作用。银屑平颗粒高、中剂量组以及阳性对照药甲氨喋呤、银屑灵组可明显地降低心得安诱导的豚鼠银屑病模型耳组织匀浆中IFN-γ含量,增加保护性细胞因子IL-10的含量,与模型组相比差异有显著性(P＜0.05)。结果表明银屑平颗粒对心得安诱导的豚鼠银屑病模型具有治疗作用,其可能通过调整机体的免疫异常发挥治疗银屑病的作用。
2.银屑平颗粒对角叉菜胶致大鼠足跖肿的干预作用:在角叉菜胶致炎后2h,银屑平颗粒三个剂量组及阳性药银屑灵可明显抑制角叉菜胶所致足肿胀,与模型对照组相比具有显著性差异(P＜0.05),表明银屑平颗粒具有
3.银屑平颗粒对巴豆油致小鼠耳肿胀的干预作用:银屑平颗粒高、中剂量组及阳性对照药银屑灵组可明显降低对巴豆油致小鼠耳肿胀,与模型对照组相比有显著性差异(P＜0.05),表明银屑平颗粒具有明显的抗炎作用。
4.银屑平颗粒对磷酸组胺致豚鼠局部瘙痒反应的干预作用:银屑平颗粒高、中、低剂量组及阳性对照药银屑灵组可明显提高磷酸组胺致豚鼠局部瘙痒反应的致痒阈,与空白对照组差异有显著性(P＜0.05),表明银屑平颗粒能有效的抑制磷酸组胺引起的皮肤瘙痒,提示银屑平颗粒具有明显的止痒作用。
结论:银屑平颗粒可明显改善心得安诱导的豚鼠银屑病模型病理组织学改变,降低全血粘度及耳组织匀浆中IFN-γ含量,增加保护性细胞因子IL-10的含量;明显抑制角叉菜胶所致足肿胀和巴豆油致小鼠耳肿胀;并能有效抑制磷酸组胺引起的皮肤瘙痒,表明银屑平颗粒可能通过改善血液流变学和调整机体的免疫异常发挥其治疗银屑病的作用,同时具有明显的抗炎、止痒作用,可改善银屑病的炎症和瘙痒症状。