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肿瘤血管生成与肿瘤的生长，侵袭、转移及预后密切相关。有研究表明，星型细胞瘤恶性程度与血管密度呈显著正相关。肿瘤血管生成受到诸多因素的调节，其中VEGF与NO起着关键作用。体外实验表明，VEGF可促进内皮细胞增殖，增加血管通透性，而这些作用主要通过PI3-K/Akt激酶激活eNOS产生NO，继而引起一系列细胞内反应而完成。另有实验提示，NO能促进VEGF表达。但至今为止，原位星型细胞瘤中VEGF与eNOS的表达及相关研究尚未见报道。本研究旨在通过检测星型细胞瘤中血管密度及eNOS、VEGF的表达水平，探讨两者的相互调控及其与肿瘤血管生成、恶性程度之间的关系。 材料与方法 1 材料来源及准备：采用浙江大学医学院附属第一医院1997年8月到2002年3月神经外科手术切除并经病理检查证实的星形细胞瘤标本37例，其中男性23例，女性14例，年龄4-71岁，平均年龄38岁。按WHO(1990)星形细胞瘤分级法进行分级，其中良性星形细胞瘤(benign astrocytoma,B)6例，间变性星形细胞瘤(anaplastic astrocytoma,AA)12例，胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)19例，另有4例胶质增生组织(astrocytic hyperplasia,H)作对照组。标本均经福尔马林液 浙江大学医学院硕士学位论文 固定，梯度酒精脱水，二甲苯透明，浸蜡，常规石蜡包埋。 2 免疫组化染色：肿瘤组织经常规石蜡包埋后连续切片（厚 4－5 u m），行 HE和免疫组 织化学法染色GP法）。抗体包括兔抗人Vlll因子相关抗原（FVlllRAg）多抗（l 100）、兔抗人VEGF多抗门：100）及兔抗人eNOS多抗门：50），兔疫组化染色 SPT。试剂盒。按其操作说明书进行染色，并设阳性及空白对照。 观察测定：eNOS、VEGF、FVlllRAg阳性均为细胞浆着黄或棕黄色。每张免疫 组化切片分别由 2名研究者以双盲法计数 eNOS、VEGF、FVlllRAg阳性细胞。（） 选染色均匀的病变区域，在400倍视野下计数着色细胞占视野细胞总数的百分数（即 标记指数口＝着色细胞／视野细胞总数），共计数5个视野，取平均值。按标记指数 （1劝elfmgi叩ex，LI）u－，＋，＋＋，＋＋＋，＋＋＋十表不：－：0－4％：＋：5％－25为＋＋： 26％－50％：十＋十：51％－75％，十十十十：＞75％。 门）按着色强弱定性：阴性：弱川性：强阳性。 3 肿瘤微血管密度测定：在400倍视野下进行F＊1llRAg阳性血管计数，共计数5个 视野，取平均值得出每高倍镜视野下的微血管数，即微血管密度（microvascular density，MVD）。 4 统计学处理：采用SPSS10．0统计分析软件，各组数据用单向方差分析，相关性分 析川Spearman等级相关及偏相关，相关系数以r表示。 结 果 1．eNOS在星形细胞瘤中的表达及与恶性程度的关系 在胶质增生中无明显的eNOS表达于星形细胞或血管内皮之上。低级别星形细胞瘤 瘤细胞胞浆阳性率低且多呈弱阳性表达，而胶质母细胞瘤则呈强阳性表达，且以瘤巨细 胞，坏死周围阳性反应最强（其分布情况与VEGF相一致）。间变性肿瘤则处于两者之 间。在星形细胞瘤中，随着肿瘤恶性程度及血管密度的增加，瘤细胞阳性率（LI．）均有 不同程度的增加且各组间均有显著性差异（P＜o．05）。 二．VEGF在星形细胞瘤中的表达及与恶性程度的关系 3 浙江大学医学院硕士学位论文 在胶质增生中星形细胞和血管内皮细胞呈VEGF阴性反应。星形细胞瘤中，良性者 肿瘤细胞不染色或仅有少量呈弱阳性反应。随着肿瘤恶性程度增加，不但瘤细胞的着色 程度随之增加而且瘤细胞阳性率（LI。）也随之升高。各级别之间及与胶质增生间的差异 均有非常显著意义（P＜0．of）。 3．星形细胞瘤微血管密度（MVD）与恶性程度的关系 FVlllRAg仅表达于内皮细胞，而在瘤细胞内并无表达。随着星形细胞瘤恶性程度 的增加，FVlllRAg阳性血管数增加。除良性星形细胞瘤和胶质增生外，其余各组之间 差异均有显著意义仪＜0刀5）。 4．星形细胞瘤中VEGF，eNOS表达与MVD间的相互关系 在星形细胞瘤、胶质增生中，eNOS的表达规律与VEGF、MVD均具有某种程度的 一致性。随着星形细胞瘤恶性程度的增加，eNOS、VEGF阳性率及MVD均增加。VEGF、 eNOS之间，VEGF、eNOS与MVD之间均呈正相关。 结 论