中药熏洗促进大鼠失神经支配骨骼肌损伤修复的实验研究

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目的研究熏洗一号方促进失神经支配骨骼肌损伤修复的机理。方法120只雄性SD大鼠,随机取90只大鼠造模成功后,随机分为熏洗一号方组、丹参组和模型组,剩余30只设为空白对照组,不做处理。各组实验动物分别在术后7天、14天和21天处死,股直肌肌腹组织块取材,常规HE染色,分别观察失神经支配后骨骼肌结构,乙酰胆碱酯酶活性,NGF、bFGF免疫组织化学染色和骨骼肌匀浆液Na~+-K~+-ATP酶改变。结果1.HE染色结果:术后7天:失神经早期骨骼肌中绝大多数肌丝肌节排列尚规则,可见到着色变浅。熏洗一号方组,肌纤维未见明显改变,部分肌纤维充血或坏死,但形态完整,有血管内皮充血。丹参组肌纤维水肿,肌纤维排列紊乱。术后14天:熏洗一号方组,肌纤维周围无明显增生的胶原纤维。丹参组肌纤维坏死或变性。模型组肌纤维增生显著,深入肌梭,代替肌肉组织,肌纤维排列紊乱。术后21天:熏洗一号方组,肌纤维排列尚整齐,极少有胶原纤维组织长入肌组织。丹参组肌细胞皱缩,纤维组织增生明显。模型组肌丝排列明显紊乱,大量纤维组织增生。2.乙酰胆碱酯酶活性:术后7天:各组乙酰胆碱酯酶活性较弱,丹参组和模型组与空白对照组相比(P<0.05),熏洗一号方组与空白组相比(P>0.05)。术后14天:熏洗一号方组乙酰胆碱酯酶活性增强,但与空白组相比(P>0.05),丹参组分别与模型组和空白对照组相比(P<0.01)。术后21天:熏洗一号方组乙酰胆碱酯酶活性强,接近于正常,染色均匀,运动终板结构规则,呈椭圆形或卵圆形花纹状结构,与空白组相比(P>0.05);模型组和丹参组乙酰胆碱酯酶活性弱,与空白对照组相比(P<0.01)。3.免疫组织化学染色观察:(1)NGF表达:术后7天:熏洗一号方组,肌梭梭内纤维肌细胞染色阳性,成纤维细胞、血管内皮细胞染色较弱。丹参组肌梭肌细胞染色弱阳性。模型组肌梭变小,未见明显染色。术后14天:熏洗一号方组,增生的胶原纤维染色阳性,血管内皮细胞染色阳性,肌梭未见明显染色。丹参组丹参组成纤维细胞染色阳性。模型组肌梭萎缩,肌细胞染色阴性。术后21天:熏洗一号方组,增生的胶原纤维组织染色弱阳性。丹参组纤维组织未见染色。(2)bFGF表达:术后7天:熏洗一号方组肌细胞和成纤维细胞染色阳性。丹参组成纤维细胞染色阳性。模型组成纤维细胞染色阳性。术后14天:熏洗一号方组骨骼肌基底膜染色强阳性,成纤维细胞染色阳性,肌梭内有少量肌细胞染色阳性。丹参组核肌梭内成纤维细胞染色阳性。模型组肌梭内细胞染色很浅。术后21天:熏洗一号方组肌梭肌细胞染色阳性,神经末梢处成纤维细胞染色强阳性。丹参组血管内皮细胞有散在阳性细胞。模型组未见染色,肌纤维边缘不规则相对大于正常。4.骨骼肌匀浆液Na~+-K~+-ATP结果:术后7天各组Na~+-K~+-ATP酶组间比较没有统计学意义(P>0.05)。术后14天熏洗一号方组与空白对照组对比(P<0.05)。术后21天,熏洗一号方组与空白对照组对比(P<0.01),且熏洗一号方组Na~+-K~+-ATP酶含量最高。结论1.失神经支配骨骼肌损伤的修复与NGF和bFGF的变化有关,骨骼肌失去神经营养因子(NGF)的营养发生萎缩。bFGF能促进运动神经纤维的再生,对神经肌肉接头的形成具有重要作用,能促进神经损伤后肌肉功能的恢复。2.熏洗一号方能延缓神经肌肉运动终板(Motor endplate,MEP)与效应器的变性。3.熏洗一号方能改善失神经支配骨骼肌的营养供应、延缓骨骼肌的萎缩。
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