小鼠基因sidt2的可变剪接研究及功能初步探讨

来源 :中国人民解放军军事医学科学院 | 被引量 : 7次 | 上传用户:ccwawa
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RNA干扰(RNA interference,RNAi)是由双链RNA(double strands RNA,dsRNA)引起的序列特异性转录后基因沉默过程,它具有系统性的特性,即该现象可以在细胞或组织间传递,或从亲代传递到子代。线虫sid-1基因是系统性RNAi关键基因,SID-1蛋白可能作为一种膜通道在系统性RNAi中起到转运dsRNA的作用。在大鼠、小鼠、人等多种动物中均存在sid1的同源基因,根据其序列同源性又可分为两个家族sidt1和sidt2,本论文对小鼠sidt2基因的结构和功能进行了相关的初步研究。小鼠sidt2基因包括两条序列,即BC051101和BC023957,它们的编码区仅长度相差63个碱基,因此将其分别命名为sidt2(1)和sidt2(s)。我们通过RT-PCR检测了两条序列的组织表达谱。我们还通过基因组序列比对及PCR对二者进行了染色体定位,并构建可变剪接报告载体,观察其在细胞内的剪接行为,验证了二者为同一基因的可变剪接产物。另外,我们通过RNAi技术研究了剪接因子CLK2、SNRPB及hnRNP A1对sidt2可变剪接的影响,发现当抑制上述剪接因子表达时,内源的sidt2基因的剪接形式并未发生明显变化,推测可能与可变剪接机制复杂、参与其中的剪接因子种类复杂等有关;而hnRNPA1的抑制则会导致可变剪接报告载体载细胞内的转录受到明显抑制。我们还对小鼠sidt2(l/s)进行了蛋白结构预测及亚细胞定位的研究,结果表明SIDT2(L/S)为多重跨膜蛋白,主要定位在细胞的膜系统。根据大鼠与小鼠sidt2(l)基因的高度同源性,我们分离培养了大鼠的原代肝细胞,并通过RT-PCR验证其中sidt2(l)占大多数。siRNA导入实验发现FAM标记的siRNA能够在不借助脂质体的条件下进入大鼠原代肝细胞,提示sidt2(l)基因可能具有协助siRNA导入细胞的作用。
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