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白细胞沿着血管内皮滚动、稳定粘附和跨内皮迁移,最终到达炎症部位是一个复杂的多步骤的过程,它的精确调控与机体的宿主防御和炎症反应密切相关。有多种粘附分子参与这一事件,其中β2整合素主要介导白细胞稳定粘附于血管内皮上和跨内皮的迁移。β2整合素是一类仅表达于白细胞表面的粘附分子家族,它包括四个成员,由一个共同的β亚基分别与四种α亚基形成非共价结合的异源二聚体。在静息的白细胞中,β2整合素以一种低亲和力和非粘附的状态存在。在炎症部位产生的细胞因子和趋化因子的刺激下,β2整合素能够迅速活化与其配体结合,这个过程为整合素的“inside—out”信号。活化的整合素能产生“outside—in”信号来调节细胞的骨架变化以及信号转导。β2整合素的信号对于中性粒细胞的稳定粘附和伸展非常关键,大量证据表明中性粒细胞的呼吸爆发、脱颗粒、蛋白的酪氨酸磷酸化等生理事件都依赖于β2整合素介导的细胞粘附。但是,对于中性粒细胞中β2整合素是如何调控细胞粘附的机制还不十分清楚。在中性粒细胞中,粘附引起的β2整合素的交联能够活化多种非受体酪氨酸激酶,这些激酶与细胞的骨架重排、生长、存活、运动密切相关。c—Abl激酶是一种非受体酪氨酸激酶,它参与多种受体引起的信号转导,并且参与了F—肌动蛋白依赖的细胞骨架变化。我们推测,c—Abl激酶可能参与了β2整合素介导的中性粒细胞粘附。本文主要探讨了c—Abl激酶在中性粒细胞的β2整合素信号转导中的功能和作用机制。
我们的研究发现,在中性粒细胞中,β2整合素的交联能够增强c—Abl激酶的活性。细胞因子TNF—α能够引起细胞表面整合素表达的增加和活性的增强,但是c—Abl激酶抑制剂STI571并不影响这一变化,表明c—Abl激酶不参与TNF—α引起的整合素inside—out活化。而c—Abl激酶的抑制能显著降低细胞的稳定粘附和伸展,当干涉胞内的c—Abl激酶表达后也有相似的作用,因此c—Abl激酶主要参与了β2整合素的outside—in信号通路。
在静息的中性粒细胞中,c—Abl激酶均匀的分布在细胞质内,而β2整合素介导细胞粘附之后,c—Abl激酶就募集到β2整合素富集的部位。通过蛋白质免疫沉淀和GSTpull—down等实验,我们发现在β2整合素交联的中性粒细胞中,β2整合素与c—Abl激酶存在于同一个蛋白质复合体中,但二者的结合不是直接的。talin是一类骨架蛋白,它的头部与中性粒细胞中的β2整合素的胞浆尾部直接并持续地结合。活化的c—Abl激酶通过其SH3结构域与talin的头部结合,进而募集到β2整合素的胞浆尾部。
Vav是一类鸟苷酸交换因子,它参与了β2整合素对中性粒细胞粘附的调控。我们的实验发现,在中性粒细胞中c—Abl激酶与Vav持续结合,并且在β2整合素产生的信号通路中c—Abl激酶能够调节Vav的活性。二者的作用方式是通过c—Abl激酶的SH3结构域与Vav的SH2结构域的结合。通过点突变实验,我们发现c—Abl激酶SH3结构域中的134位酪氨酸对于二者的结合很关键。
我们的结果证明了,在β2整合素介导的中性粒细胞粘附过程中,c—Abl激酶能够被β2整合素活化。talin作为持续与β2整合素胞浆尾部结合的骨架蛋白,对于c—Abl激酶募集到β2整合素非常关键。活化的c—Abl激酶能够通过调节Vav的活性进而参与了对中性粒细胞的稳定粘附和伸展的调控。本论文揭示了c—Abl激酶在天然免疫过程中的新作用。