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目的:培养人类骨髓间充质干细胞（Mesenchymal stem cells,MSCs）并建立其衰老模型;收集并比较年轻和衰老MSCs条件培养基（Conditioned medium for mesenchymal stem cells,MSC-CM）对多发性骨髓瘤（Multiple myeloma,MM）增殖的影响;进一步探讨衰老MSCs对多发性骨髓瘤（MM）恶性增殖的机制研究。方法:（1）MSCs的鉴定及衰老模型的建立:收集正常人的骨髓血标本,经Ficoll密度梯度离心法及贴壁纯化健康供者骨髓来源的间充质干细胞,应用浓度为200μM的H2O2诱导培养2小时,建立MSCs衰老模型,取第3代MSCs经过结晶紫染色观察形态,流式细胞仪鉴定其表面标记物;茜素红、油红O、甲苯胺蓝染色鉴定两组MSCs的多向分化能力,β-半乳糖苷酶特异性染色鉴定衰老;MTT比色增殖法测定年轻和衰老MSCs生长曲线;Ed U荧光染色检测细胞增殖率;分别采用Western blot和Real-time PCR在蛋白和m RNA水平验证衰老相关基因表达;（2）年轻和衰老MSC-CM对MM细胞系的影响:收集第3-5代年轻和衰老的间充质干细胞上清培养基,经过超滤离心管制备浓缩间充质干细胞条件培养基,将其诱导多发性骨髓瘤细胞系48小时,采用MTT比色增殖法、Ed U荧光染色检测MM细胞增殖;Transwell检测细胞迁移率;流式细胞术检测细胞凋亡率;（3）MSCs-CM介导Wnt/β-catenin/Hippo通路对MM增殖的分子机制的探讨:收集健康供者及MM患者骨髓血标本,Ficoll密度梯度离心法提取单个核细胞,Western blot测YAP1表达差异;双抗体夹心酶标免疫分析法（ELISA）检测两组MSCs浓缩条件培养液中IL-6的含量,Western blot检测Wnt/β-catenin/Hippo信号通路表达情况;调整YAP抑制剂维替泊芬（Verteporfin,VP）最佳适宜浓度,介导下调目的基因YAP1表达,Western-blot检测VP处理24小时前后YAP1信号通路下游目的基因p73,抗凋亡基因Bcl-2、BTK在蛋白水平表达情况。所有数据均为3次独立重复实验所得,数据采用SPSS23.0分析,Graphpad Prism 8.3软件绘图并分析,连续变量数据以均数±标准差（SD）表示,采用t检验进行组间比较,流式结果用Flowjo V10分析。P＜0.05为差异有显著性意义,并绘制统计图。结果:（1）Ficoll密度梯度离心法及贴壁纯化分离MSCs,通过浓度为200μM的H2O2诱导建立衰老MSCs模型,流式细胞仪检测正常和衰老MSCs免疫表型,结果显示两组MSCs均高表达CD90,CD105及CD73,不表达CD14,CD34,CD45,CD11b和HLA-DR;两组MSCs均具有成骨、成脂和成软骨分化潜能,与年轻组相比,衰老组MSCs多向分化能力减弱。β-半乳糖苷酶特异性染色鉴定衰老细胞模型,衰老MSCs阳性细胞率多于年轻MSCs;与年轻组相比,衰老组MSCs中的衰老基因p53、p16、p21的表达增高,衰老MSCs增长速度减慢;（2）使用年轻MSC-CM和衰老MSC-CM作用MM细胞系RPMI8226、U266,与年轻MSC-CM诱导MM细胞系相比较,衰老MSC-CM作用的MM细胞系增殖、迁移率增高,凋亡率下降;（3）ELISA结果显示,衰老MSCs条件培养基中IL-6的含量高于年轻组MSCs条件培养液;随之采用Western-blot检测骨髓单个核细胞YAP1表达量,发现健康供者YAP1表达量高于MM患者;应用Western blot法检测不同条件培养基作用的MM细胞系,发现:与年轻MSC-CM比较,衰老MSC-CM作用的MM细胞系,Wnt/β-catenin/Hippo通路激活,其下游凋亡相关基因p73表达下降,抗凋亡基因Bcl-2、BTK表达升高,加入YAP抑制剂维替泊芬后,MM细胞株的抗凋亡相关基因表达增加,β-catenin表达上调,YAP1及p73表达下调。结论:衰老MSCs条件培养基具有更强的促进多发性骨髓瘤的恶性增殖作用,其可能通过分泌高水平IL-6,激活Wnt/β-catenin/Hippo通路,下调YAP1促进MM细胞增殖。