禽传染性支气管炎病毒（Infectious Bronchitis Virus,IBV）是冠状病毒科、冠状病毒属的代表毒株,为单股正链RNA病毒。在疾病流行过程中由于自然环境的压力和基因组的突变、重组等因素,IBV时常出现新的基因型和血清型,且不同基因型和血清型相互交叉,使该病的防控难度增加。目前IBV的防控仍然以疫苗接种为主,主要有弱毒疫苗和灭活疫苗。本课题以临床分离到的IBV野毒株为研究对象,进行了致病力和灭活疫苗效力探究,并对该毒株在受试鸡体内的感染规律进行了分析,以期对IBV的诊断和防控提供实践指导作用。1.一株QX型IBV的分离鉴定本试验选择国内部分IBV流行严重地区2017年8月至2018年3月送检的22份疑似感染IBV的病料,使用鸡胚法从中分离得到一株病毒,并通过致鸡胚矮小试验、RT-PCR试验、电镜试验、S1基因序列分析和动物回归试验等对分离毒株进行鉴定。致鸡胚矮小试验显示分离毒株可使鸡胚发育不良,呈“侏儒胚”;RT-PCR试验显示分离毒株含有S基因的1700 bp条带和M基因的740 bp条带,证明分离毒株为IBV;电镜试验在分离毒株样品中观察到IBV病毒粒子;S1基因序列分析结果显示分离毒株属于QX型IBV;动物回归试验显示SPF鸡感染分离毒株后出现气管纤毛脱落且内壁出血、“花斑肾”和腺胃乳头消失或糜烂等症状,严重者出现死亡并呈现QX型IBV典型症状,故将其命名为RPVA0408,进而进行后续研究。2.qRT-PCR检测方法建立及应用为了提高分离毒株RPVA0408的检测效率,本试验针对其S1基因序列建立了 qRT-PCR（TaqMan探针）检测方法。结果显示,试验建立的qRT-PCR检测方法标准曲线为y=-3.387x+43.060,R2=0.999,扩增效率为97.4%,敏感性比普通PCR高1000倍,可检测到模板浓度为42.1 copies/μL,且重复性良好。拷贝数与EID50对应关系的试验结果显示,在稳定保存病毒液的前提下,拷贝数与EID50的线性关系为y=0.2492x+1.341×106（x为拷贝数,y为EID50）,R2=0.9564,用拷贝数替代EID50,并将其应用于疫苗中抗原含量的标定,提高了疫苗生产效率。3.分离毒株RPVA0408灭活疫苗的初步研究为了研究分离毒株RPVA0408的致病力和免疫原性,本试验对该毒株分别进行了致病性研究,病毒在鸡体内的分布和排泄,疫苗安全性研究和效力评价等。分离毒株对SPF鸡致病规律研究试验证明受试鸡感染分离毒株后泄殖腔拭子排毒持续21天,且排毒时间与攻毒剂量呈正相关;同一攻毒剂量条件下,分离毒株对3周龄SPF鸡所致的临床症状持续时间比9周龄SPF鸡更长,且造成的病理损伤更严重。RPVA0408制成灭活疫苗后的效力试验结果显示,不同病毒含量灭活疫苗的免疫效果差异较大;RPVA0408病毒液按水油比1:2制备灭活疫苗,灭活前病毒含量达到106.69EID50/0.1mL以上时,疫苗保护率即可以达到90%,且免疫后受试鸡血清HI抗体在2个月达到10.6log2,并在6个月的观察期内一直维持在较高水平,证明RPVA0408分离毒株具有良好的免疫原性。