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背景脂肪间充质干细胞(ADMSCs)目前是心肌细胞移植和心肌组织工程最具应用前景的干细胞之一。ADMSCs由具有不同的生物学特性和分化潜能的亚群组成,目前研究多为混合细胞群,缺少研究的针对性和实效性,这也许也是影响疗效的重要原因之一。筛选心肌分化的优势亚群并研究其生物学特性,有助于提高研究的针对性和细胞治疗的效果。目的探讨CD73在脂肪间充质干细胞向心肌分化和细胞因子分泌中的作用,证明CD73分子在心肌修复中的功能。方法1.体外培养鉴定小鼠脂肪源间充质干细胞(ADMSCs),检测表面标记CD29、CD44、CD73和CD45的表达及成骨、成脂、成心肌分化潜能。2.流式细胞术分选ADMSCs CD73+亚群和CD73-亚群。使用CD73特异性抑制剂5′-α,β-亚甲基二磷酸腺苷(adenosine 5′-α,β-methylene diphosphate,APCP)抑制ADMSCs CD73的表达。实验分组:CD73+组、CD73-组和CD73+-APCP组。3.构建CD73过表达(CD73-OE)、CD73干扰(CD73-RNAi)和GFP(C-GFP)慢病毒载体,感染ADMSCs。实验分组:CD73-OE组、CD73-RNAi组和C-GFP组。免疫荧光法检测病毒转染效率。4.分别对CD73+组、CD73-组和CD73+-APCP组进行心肌化诱导,免疫荧光法和流式细胞术检测心肌特异性肌钙蛋白T(cTnT)表达情况。5.提取各组细胞培养上清液,ELISA法检测细胞因子VEGF、TNF-α的浓度。结果1.ADMSCs表面标记检测和诱导分化结果显示:CD29、CD44的表达率分别为53.1±1.1%、34.8±2.1%,CD73表达不稳定,在1.8%~19.7%之间波动,不表达造血干细胞标记CD45;在体外特定培养条件下,ADMSCs可诱导分化为成骨细胞、脂肪细胞和心肌样细胞。2.5-aza诱导21天,免疫荧光显示各组均表达心肌特异性蛋白cTnT,CD73+组cTnT阳性率为85.0±6.3%,CD73-组cTnT阳性率为2.1±0.6%,CD73+-APCP组cTnT阳性率为4.8±1.7%,CD73+组心肌化诱导效率高于CD73+-APCP组和CD73-组(P<0.05)。流式细胞术检测结果显示cTnT表达率:CD73+组为44.9%,CD73-组为1.5%,CD73+-APCP组为3.3%。3.ELISA法检测VEGF结果显示,5-aza诱导前:CD73+-APCP组明显低于CD73+组和CD73-组,P<0.01;5-aza诱导10天:CD73+-APCP组明显低于CD73+组和CD73-组,P<0.01;CD73+组高于CD73-组,P<0.05;5-aza诱导20天:CD73+-APCP组明显低于CD73+组和CD73-组,P<0.01;CD73+组高于CD73-组,P<0.05。ELISA法检测TNF-α结果显示:分别在5-aza诱导前,诱导10天,诱导20天,CD73+-APCP组明显低于CD73+组和CD73-组,P<0.01;CD73+组与CD73-组比较,差异无统计学意义。4.慢病毒转染后,ELISA法检测VEGF结果显示:CD73-OE组高于CD73-RNAi组和C-GFP组,P<0.05;TNF-α浓度:CD73-OE低于CD73-RNAi组和C-GFP组,P<0.05。结论CD73能促进ADMSCs向心肌分化,促进VEGF分泌,抑制TNF-α分泌。