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以猪脑垂体总RNA为模板，5’-CTAGGATCC CCG GCT GTG ATG GCT GCA-3’（BamHI）和5’-CA GAATTC GCA ACA GAG ATG CCC AG-3’（EcoRI）为引物，通过RT-PCR克隆了猪生长激素（pGH）基因编码区cDNA。猪生长激素基因pGH cDNA ORF编码216个氨基酸残基。该cDNA编码蛋白序列与已有报道的大河猪（Dahe）pGH 100％同源，而与其它地方猪种的pGH前体蛋白序列的同源性为98.6％～99.5％。猪生长激素基因的原核表达及其抗体制备：将pGH基因亚克隆到原核表达载体pGEX4T-1中，构建了重组原核表达质粒pGEX4T-1／pGH。诱导表达产物的SDS-PAGE分析结果表明出现与预期一致的1条50.4KDa的特异蛋白新带，重组pGH得到了正确表达。分离包涵体形式表达的融合蛋白GST-pGH，透析得到的重组融合蛋白进行家兔免疫，制备并纯化抗pGH的多克隆抗体；经酶联免疫吸附测定、蛋白质印迹分析和免疫组织化学方法检测，结果证实制备的抗血清对猪生长激素具免疫特异性。采用辛酸—硫酸铵沉淀法纯化的兔抗pGH多克隆抗体达到SDS-PAGE纯；Western Blotting检测结果表明：猪天然pGH蛋白（24.4 KDa）和融合表达蛋白GST-pGH （50.4KDa）能特异性结合该pGH多抗，猪脑垂体组织的免疫组化分析结果也证实了pGH多克隆抗体的特异性。通过构建表达质粒pPIC-3.5K／pGH，我们研究了猪生长激素基因在酵母细胞中的表达。将猪生长激素（pGH）基因cDNA编码区片断定向插入pMD18-T质粒，转化大肠杆菌JM109，用菌落PCR和质粒PCR方法筛选阳性克隆；以BamH I和EcoRI酶切鉴定重组质粒。将重组质粒用BamH I和EcoR I酶切，胶回收目的酶切片断并定向插入pPIC-3.5K质粒，重组质粒命名为pPIC-3.5K／pGH。该重组质粒经SalI酶切线性化处理后电击转化GS115酵母，采用MD和MM培养基筛选重组子，提取初筛重组子的基因组DNA。PCR方法进一步鉴定，获得的重组酵母菌以甲醇诱导目标蛋白表达，产物经SDS-PAGE和Western-blot分析，复筛得到高效表达pGH的重组酵母，命名为pPIC-3.5K／pGH／GS115。SDS-PAGE和Western-blot分析证明重组酵母诱导表达了pGH蛋白，分子量接近25KDa，与预期的24.4KDa的猪生长激素基因编码蛋白质大小一致。猪生长激素基因在哺乳动物细胞中的表达：将pGH cDNA亚克隆到真核表达载体VR1020上，构建了重组真核表达质粒VpGH；利用脂质体法转染哺乳动物细胞株COS7，分别于24h、48h、72h提取转染细胞总RNA，对转染后的COS7细胞进RT-PCR、ELISA和免疫荧光分析。RT-PCR结果显示转染细胞24小时总RNA中已含有目的cDNA片段转录的对应mRNA；ELISA和免疫荧光分析结果表明重组质粒转染后的COS7细胞中表达了pGH基因的蛋白产物。本论文采用脂质体包裹的VpGH进行了小鼠体内转染表达效应分析，以确定VpGH对小鼠体重增长的影响。通过给昆明小鼠注射VpGH、空载体VR1020和生理盐水，对小鼠体重、免疫细胞数量、血清GH含量和体液免疫水平的影响进行比较分析，研究结果表明：VpGH能显著地促进小鼠的生长和明显增加其白细胞数量，但对体液免疫水平无显著影响。进一步进行猪的体内转染表达效应试验的初步研究，结果表明脂质体包裹VpGH明显促进猪的生长。