本文应用生物力学、细胞生物学、分子免疫学等方法和技术，以肝实质细胞癌（hepatocellular carcinoma ，HCC）细胞为研究对象，继承本院在肝胆流变学领域的研究特色，参照Dong等方法，研究肿瘤细胞在基底膜成分趋化作用下伪足形成的动力学机理。本研究方法具有直观、精细，易定量的特点；建立的双微吸管趋化实验方法，实现了同一细胞上伪足形成的严格对比研究。同时所建立的实验方法还为癌转移研究和抗癌转移药物抗趋化特性的评价提供了可靠的单细胞研究方法。本课题的主要研究内容及结果如下：（1） 用单微吸管法对肝癌细胞在IV型胶原（type IV collagen，Col IV）、层粘连蛋白（laminin，LN）趋化作用下伪足生长的动态过程，同时考察了肝癌细胞伪足的形成分别对趋化液中Col IV和LN浓度的依赖性。随着ColIV趋化剂浓度的增加（100μg/ml⁴00μg/ml），HCC细胞的伪足长度增加；当ColIV浓度≥400μg/ml时，细胞伪足的长度基本不变。随着LN趋化剂浓度的增加（50μg/ml²00μg/ml），HCC细胞的伪足长度增加；当LN浓度≥200μg/ml 时，细胞伪足的长度基本不变。（2） 应用双微管法研究浓度不对称趋化实验中双侧伪足形成的相互影响和趋化剂种类不同时趋化性伪足形成的强度。实验结果表明：固定单侧微吸管浓度，浓度高的一侧细胞伪足长度高于浓度低的一侧；双侧伪足一侧因趋化浓度下降而伪足生成减弱可使另一侧伪足生成增强。比较趋化剂种类不同而浓度相同时，即双侧微吸管中一侧充满200μg/mlCol IV，而另一侧为200μg/ml LN， LN的趋化性伪足生长速率比ColIV更快，且伪足的峰值更大。（3） FACS对HCC细胞表面整合素表达的分析。对选定的HCC细胞株（7721）表面进行整合素α₁、α₂、α₃、α₄、α₅、α₆、、β₁亚单位表达率的测定。结果显示：对选定的细胞株，整合素α₁、α₃、β₁呈强表达，其表达率分别为95.07%, 95.55%, 95.78%;α₅表达率为34%^{[58]}；而α₂、α₄、α₆呈弱表达, 其表达率分别为23.17%,2.47%,14.29%。为了讨论整合素阻断对HCC细胞趋化性伪足形成的影响，将整合素抗体加入充满趋化剂的单微吸管中，动态观察整合素阻断对趋化性伪足形成的影响。为进一步研究整合素阻断对细胞两侧伪足形成的相互影响上，采用一种相互对称性双微吸管法，即细胞两侧微吸管中趋化剂种类及浓度相同，于一侧微吸管内加入单克隆抗体anti-α_n（n=1⁶）和anti-β₁研究细胞表面整合素阻断对双侧伪足形成平衡的影响。结果表明：通过整合素阻断实验，Anti-α₂、Anti-α₃、Anti-β₁<WP=5>（4） 对肝癌细胞在ColIV趋化运动时伪足的生长有较强的抑制作用（P<0.01），表明HCC细胞在体外IV胶原环境下，主要通过α₂β₁、α₃β₁受体的影响HCC细胞的趋化伪足形成；同时，Anti-α₃、Anti-α₆、Anti-β₁对肝癌细胞在LN趋化运动时伪足的生长有较强的抑制作用（P<0.01），HCC细胞在体外LN环境下，主要通过α₃β₁ 和α₆β₁受体的影响HCC细胞的趋化性伪足形成。（5） 整合素阻断对HCC与Col IV裱衬表面粘附力的影响i.未加入抗体的控制组裱衬浓度的选择:本研究Col IV浓度选为5μg/ml，其粘附力为952±134（×10-10N ，n=60）。ii.依次加入不同浓度的单克隆抗体，考察整合素阻断对HCC细胞与Col IV裱衬表面粘附力的影响。结果表明：与控制组比较，HCC细胞与ColIV的粘附加入单抗体后，anti-α₁几乎对粘附无影响；anti-α₅影响较小；anti-α₆对粘附的抑制作用最大，其次为anti-α₄、anti- ?1、anti-α₃、anti-α₂。说明在肝癌细胞与IV型胶原裱衬表面粘附过程中，整合素α₂、α₃、α₄、α₆、?1对肝癌细胞的粘附过程有影响，而α₅影响较小，α₁几乎对粘附无影响。（6） Boyden Chamber 研究整合素阻断对群体细胞趋化性迁移运动的影响 采用Boyden小室法，考察肝癌细胞整合素阻断对细胞分别向ColIV和LN趋化迁移运动的影响。对IV型胶原而言，与控制组比较（未经整合素阻断的细胞），加入anti-α₁几乎对HCC细胞的趋化性迁移无影响，而分别加入anti-α₄、anti-α₅、anti-α₂、anti-α₃、anti-α₆、anti- ?1时，细胞的趋化性迁移受到的抑制作用逐渐增加；对LN而言，与控制组比较（未经整合素阻断的细胞），加入anti-α₄、anti-α₁几乎对HCC细胞的趋化性迁移无影响，而分别加入anti-α₂对肝癌细胞的迁移抑制作用最强，其次是anti-α₅、anti- ?1、anti-α₆、anti-α₃对细胞的迁移有着不同程度的抑制。（7） 从FACS及Boyden小室和微吸管结果实验研究HCC细胞趋化性迁移中相关的整合素分子与趋化性伪足形成和粘附相关的整合素分子的关系。由微吸管实验可见：肝癌细胞对IV型胶原趋化性伪足形成过程中，整合素亚单位α₂、α₃、β₁为趋化性伪足形成的重要受体分子；从整合素阻断研究考察HCC与Col IV胶原裱衬表面粘附力的影响发现，整合素α₂、α₃、α₄、α₆、?1对肝癌细胞的粘附过程有影响，而α₅影响相对较小，α₁几乎对粘附无影响。而Boyden小室对群体细胞趋化性迁移的研究表明：整合素α₅、α₂、α₃、α₆、?1细胞的趋化迁移的影响逐渐明显，而α