苦豆子提取物对肠癌细胞株受体酪氨酸激酶EphA1的影响

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目的:探讨苦豆子提取物对人肠癌细胞株HCT-116的抗增殖及诱导凋亡的效果,及其对受体酪氨酸激酶家族成员EphA1基因表达的影响,为中医药进一步提高治疗肠癌疗效提供实验依据。方法:使用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法,加入终浓度分别为:0.6mg/mL,0.9mg/mL,1.2mg/mL,1.5mg/mL,1.8mg/mL,2.1mg/mL的苦豆子提取物,计算细胞生长抑制率,测定IC50值;分别用1.2mg/mL,1.5mg/mL苦豆子提取物及空白培养基处理48小时后,使用流式细胞法(FCM)检测苦豆子提取物对人肠癌HCT116细胞生长抑制和诱导凋亡作用;Western Blot检测EphA1基因蛋白的表达,处理组给予苦豆子提取物IC50浓度,即1.2mg/ml,分别于48及72小时收集细胞,提取细胞总蛋白,抗体孵育后,于成像系统上检测蛋白条带,用Quantity one软件进行蛋白条带灰度分析。并进行相关统计学分析。结果:实验显示,1.不同浓度苦豆子提取物作用于人肠癌细胞株HCT116后,与对照组比较细胞生长明显受到抑制(P<0.05),其IC50为1.2mg/ml,并有良好的量效关系;2.流式细胞法显示,细胞凋亡百分率随着药物作用浓度的增加而增加;3.Western blot实验显示苦豆子提取物分别作用于HCT116细胞48h,72h EphA1的蛋白表达随着苦豆子提取物作用时间的延长,出现了先增高,后降低的表达趋势。不同时相间的表达比较均有显著性差异。结论:中药苦豆子提取物能抑制人肠癌HCT-116细胞增殖,并能诱导其凋亡,对EphA1蛋白表达有一定程度的影响。
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