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①呼吸道合胞病毒(RSV)接种大鼠，建立肾病大鼠模型，进一步确定RSV在该病发生发展中重要作用。②研究弹性蛋白酶(ELA)-a1抗胰蛋白酶(a1-AT)失衡，ELA酶解和所带强阳电荷在RSV致大鼠肾小球损伤，尿蛋白增加，从而促进肾病发生发展过程中的作用。③研究RSV感染细胞机理及其对肾小球滤过屏障损伤作用。④研究N-脱乙酰基酶／N-硫酸基转移酶-1(NDSTl)在RSV致大鼠肾病中作用。探讨RSV致大鼠肾病多种损伤机制，为微小病变型肾病(MCNS)发病机理的深入研究提供新思路。
方法
1．以不同滴度RSV(6×10<2>，6x10<4>，6x10<6>PFU)接种大鼠，观察接种后4，8，14，28d(RSV<,4>，RSV<,8>，RSV<,l4>，RSV<,28>)光镜、电镜下肾组织结构改变；分析24h尿蛋白、尿糖胺聚糖(GAG)定量及血白蛋白、胆固醇、尿素氮和肌酐变化；并通过原位杂交及空斑形成试验检测肾、肺组织RSV。
2．酶底物法和重氮复盐显色法分别检测6x10<6>PFU RSV<,4>，RSV<,8>，RSV<,14>，RSV<,28>组及相应正常对照大鼠血浆ELA和a1-AT活性；间接免疫荧光法观察ELA在肾脏的表达和分布。
3．分别用ELA I(0.1μg／ml)和ELAII(0.5μg／ml)、ELA+低分子肝素(LMWH)、鱼精蛋白、鱼精蛋白+ELA、<,o>乙酰肝素酶(Hpa)、Hpa +ELA等处理体外培养 Hela细胞，以PBS处理为对照，然后接种 6x10<1>pFU RSV，或6x10<1>pFU RSV与LMWH孵育后再接种Hela细胞，通过原位杂交和空斑形成试验分析RSV感染力。
4．实时荧光定量PCR和Western Blot分别检测6x10<6>PFU RSV<,4>，RSV<,8>，RSV<,l4>，RSV<,28>组及相应正常对照大鼠肾组织NDST-1 mRNA及蛋白表达。
结果
1．接种RSV后尿蛋白及尿GAG增加，二者呈正相关关系，肾小球上皮细胞足突肿胀融合，尤以6×10<,6>pFU RSV<,l4，28>组表现最为典型，伴低白蛋白血症，肾组织光镜和电镜下改变(足突广泛融合)与人类MCNS 基本一致，且原位杂交显示肾小球上皮细胞／系膜细胞及肾小管上皮细胞中均可见RSVRNA阳性信号表达。
2.6×10<6> PFU RSV各组血浆ELA／al-AT均较正常对照组增高，且与尿蛋白及尿GAG含量呈显著正相关关系。RSV<,4,8,14>组肾组织均有ELA 表达，主要分布于肾小球基底膜(GBM)，以．RSV<,l4，8>组较强，与血浆ELA／al-AT变化趋势一致，肾小管无明显ELA表达。
3．体外实验Hela细胞经ELA(0.1μg／ml)、鱼精蛋白、鱼精蛋白+ ELA、npa、Hpa+ELA处理后，RSV感染力较PBS处理对照组降低，经ELA+LMWH：处理后RSV感染力无明显减低，而RSV先与LMWH孵育后再接种Hela细胞，则对细胞感染力明显降低。Hela细胞经ELA(0.5μg／ml)处理后明显脱落。
4.6×10<6> PFU RSV各组NDST-1 mRNA及蛋白表达均较相应时间点正常对照组降低。RSV各组NDST-1 mRNA及蛋白表达均与尿蛋白定量呈负相关关系，而与尿GAG含量无明显相关关系。
结论
1．RSV可致大鼠肾病综合征。
2．RSV致大鼠肾病发生发展过程中，存在ELA—a1-AT失衡，ELA／al-AT增高，可能通过ELA分解GBM上GAG或直接电荷中和致GBM阴离子电荷筛破坏，促进蛋白尿发生发展。这一机制在RSV肾病大鼠蛋白尿，尤其是前期蛋白尿形成中可能起重要作用。
3．体外细胞实验提示RSV感染细胞需通过细胞表面硫酸乙酰肝素(HS)，主要通过RSV所带阳电荷与细胞表面带阴电荷的HS结合而作用；ELA对HS有降解作用，小剂量EIA可能通过其强阳电荷与细胞表面带阴电荷HS结合，并通过分解细胞表面HS，致细胞表面阴电荷减少，RSV不能有效结合到细胞表面而抑制RSV感染；大剂量ELA则不仅作用于细胞表面HS，且作用于其它细胞外基质成分，致细胞膜破坏或细胞裂解，从而加重RSV感染。
4．RSV致大鼠肾病发生发展过程中，NDST-1基因及蛋白表达明显降低，可能导致GBM上硫酸化HS合成障碍，带多阴离子的HS硫酸基减少，从而破坏肾小球滤过膜电荷屏障，引起或加重蛋白尿。