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锰是植物必需的微量元素,但土壤锰浓度过高则造成锰胁迫和锰毒害,目前在我国大部分酸性土壤中锰已成为最主要的重金属污染源之一。镉是植物生长的有毒元素,是迁移性最强的重金属。利用超富集植物进行锰、镉污染土壤的原位修复是环境生物技术领域的研究热点。美洲商陆是最早被发掘的锰、镉超富集植物之一,但目前商陆超富集锰、镉的分子机制研究较少,限制了该植物在重金属污染修复方面的应用。本研究以美洲商陆为实验材料,通过同源克隆技术进行了植物体内重金属跨膜转运相关的YS3基因、跨组织转运相关的CS基因片段的克隆;利用荧光定量PCR技术分析了YS3基因、CS基因及重金属解毒相关的MT基因在植物根部和叶片组织的表达差异,以进行上述重金属相关基因的植物组织定位;利用添加不同浓度锰、镉的培养液液体培养方法获得锰、镉胁迫商陆样品,并利用qRT-PCR技术,对锰、镉胁迫商陆样品根部和叶片组织中的YS3基因、CS基因、MT基因的表达进行定量分析,以明确上述基因与锰、镉胁迫的应答关系。同源克隆结果表明:本研究获得了(1)长275bp、编码91个aa的YS3基因片段,该基因与小金海棠YSL3DNA序列同源性为79%、与可可树的YSL3氨基酸序列同源性为93%;(2)长178bp、编码58个aa的CS基因片段,该基因与甜菜CS DNA序列同源性为85%、与小金海棠的CS氨基酸序列同源性为95%。组织定位结果表明:YS3基因、CS基因、MT基因在商陆根部和叶片组织均有表达,但根部组织表达量高于叶片组织,上述3个基因在根部表达量分别是同期叶片表达量的1.27倍、1.06倍和1.67倍。基因表达的胁迫应答结果表明:商陆根部和叶片组织的YS3基因、CS基因、MT基因均参与锰、镉的胁迫应答。具体为在Cd、Mn胁迫下,叶中YS3基因的表达量为先增加后减少,在胁迫后12h表达量最大;根中该基因的表达量在高浓度Cd及各浓度Mn胁迫下为先增加后减少,在低浓度Cd胁迫下为高-低-高变化趋势,均在胁迫后12h表达量最大。在Cd胁迫下,叶中MT基因的表达量为高-低-高变化趋势,胁迫12h表达量最大;在低浓度Mn胁迫下,叶中MT基因的表达量变化趋势与Cd处理相同,表达量最大出现在12h;在高浓度Mn胁迫下呈现持续升高的变化趋势,表达量最大出现在36h。根中MT基因表达量在各浓度Cd、Mn胁迫下为先持续增加后减少的变化趋势,表达量最大出现在24h。在低浓度Cd胁迫下,叶中CS基因的表达量为高-低-高的变化趋势,表达量最大出现在12h,在高浓度Cd胁迫下表达量变化趋势为单一的下降;低浓度Mn胁迫下,叶中CS基因的表达量为先增加后减少的变化趋势,表达量最大出现在12h,在高浓度Mn处理下表达量呈现持续增加的趋势,最大表达量出现在36h。根中CS基因的表达量在Cd、Mn胁迫下均为先增加后减少的变化趋势,表达量最大出现在24h。