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宫颈癌是一种常见的女性恶性肿瘤，晚期病例临床上尚无有效的治疗方法。宫颈癌的发展是复杂的，目前的文献一致认为人乳头瘤病毒（HPV）感染是宫颈癌发病的关键，HPV编码的E6/E7蛋白通过调节长的非编码RNA（lncRNAs）促进宫颈癌的发展。例如，宫颈癌细胞中的HPV E6/E7蛋白驱动并上调lncRNA FAM83H-AS1和TMPOP2。既往的研究表明，Linc00483在卵巢癌、结直肠癌和胃癌中起致癌作用，但目前尚不清楚Linc00483是否参与了宫颈癌的发展。已有足够的研究证实，lncRNAs通过支持microRNAs来调节细胞功能和癌症的进程。例如，lncRNA-XIST通过调节mir-429促进胰腺癌进展，而lncRNA H19通过靶向mir-6515-3p促进肺癌转移。mir-508-3p是多种癌症的抑癌剂，如卵巢癌、结肠癌、和胰腺癌，但目前尚不清楚其在宫颈癌中的作用。G蛋白信号转导17（RGS17）的调节因子是一个癌基因，在癌症发展过程中可以通过多个miRNA进行调节。例如，通过靶向RGS17上调mir-199抑制肺癌的恶性进展，而mir-182通过下调RGS17的表达水平来抑制肺癌的发生，但尚不清楚RGS17是否参与了宫颈癌进展的调节。
目的：
探索Linc00483在宫颈癌组织及癌细胞系中的表达，分析其和疾病特征的关系、意义及对预后的影响。并探索其在宫颈癌进程中的作用机制，为宫颈癌的临床治疗提供潜在的治疗靶点。
方法：
1.宫颈癌组织和细胞系中Linc00483的表达水平。
1.1通过qRT-PCR测定宫颈癌组织和不同细胞系中Linc00483的相对表达。
1.2通过Kaplan-Meier分析，分析宫颈癌患者总生存率与Linc00483水平之间的相关性。
1.3用RNA-FISH检测宫颈癌细胞中Linc00483的表达和定位。
2..Linc00483对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响。
2.1通过qRT-PCR测定C33A、Siha、Hela和Caski细胞中Linc00483的含量。
2.2采用MTT法检测宫颈癌细胞活力。
2.3采用TUNEL法检测宫颈癌细胞凋亡率。
2.4用Western blot检测宫颈癌细胞中p21、Cyclin-D1、p27、bcl-2、bax、cleaved caspase-3的表达。
2.5用划痕实验检测宫颈癌细胞迁移能力。
2.6采用Transwell法测定宫颈癌细胞侵袭能力。
2.7用Western blot检测宫颈癌细胞中CyclinD1、p21、p27、Bcl-2、Bax、caspase-3、Cleaved caspase-3、MMP2、MMP9、E-cadherin和N-cadherin的表达。
3..Linc00483与mir-508-3p之间的相互作用。
3.1Linc00483与mir-508-3p的结合位点通过在线mirdb软件进行预测，并通过双荧光素酶报告基因系统进行验证。
3.2采用RNA pull down检测Linc00483中的mir-508-3p富集。
3.3通过qRT-PCR测定Linc00483对宫颈癌细胞和组织中mir-508-3p水平的影响。
3.4用pearson分析，分析宫颈癌组织中Linc00483和mir-508-3p的相关性。
4..用mir-508-3p调节RGS17的水平。
4.1利用TARGSCAN、MIRDB、MIR TARBASE等在线软件对mir-508-3p下游靶点进行预测。
4.2用双荧光素酶报告基因系统研究mir-508-3p与RGS17的调控关系。
4.3用qRT-PCR测定宫颈癌组织和宫颈癌细胞中RGS17的mRNA水平。
4.4用Western blot检测宫颈癌组织和宫颈癌细胞中RGS17的表达水平。
4.5用免疫组化法测定RGS17在宫颈癌组织中的表达和定位。
4.6用pearson分析，分析宫颈癌组织中Linc00483、mir-508-3p和RGS17mRNA水平的相关性分析。
5.Linc00483/mir-508-3p轴对宫颈癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。
5.1MTT法检测Hela和Caski细胞增殖。
5.2TUNEL法检测Hela和Caski细胞凋亡。
5.3进行划痕实验以确定Hela和Caski的细胞迁移。
5.4通过Transwell检测Hela和Caski细胞的侵袭。
5.5用Western blot检测Hela和Caski细胞中CyclinD1、p21、p27、Bcl-2、Bax、caspase-3、Cleaved caspase-3、MMP2、MMP9、E-cadherin和N-cadherin的表达。
结果：
1.宫颈癌组织和细胞系中Linc00483的表达水平
1.1与正常组织相比，Linc00483在肿瘤组织中过度表达。
1.2Linc00483的表达水平与宫颈癌患者的总生存率呈负相关。
1.3宫颈癌细胞的Linc00483水平高于永生化宫颈鳞状细胞株（ECT1/E6E7）。
1.4Linc00483在Hela和Siha细胞中高度表达。
2.Linc00483对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响
2.1过度表达的Linc00483促进了宫颈癌细胞的增殖。
2.2敲除Linc00483抑制了宫颈癌细胞的增殖。
2.3过度表达的Linc00483在宫颈癌细胞中上调了Cyclin-D1和bcl-2的表达，下调了p21、p27、bax和caspase-3的表达。
2.4过度表达的Linc00483降低了C33A和Siha细胞的凋亡率。
2.5过度表达的Linc00483增加了宫颈癌细胞迁移。
2.6过度表达的Linc00483增加了宫颈癌细胞的侵袭。
2.7过度表达的Linc00483降低了宫颈癌细胞中E-cadherin的表达，增加了MMP9、Vimentin和MMP2的表达。
3.Linc00483通过结合3UTR区域抑制宫颈癌细胞中的mir-508-3p水平。
3.1mir-508-3p mimics成功地降低了HEK-293T细胞的相对荧光素酶活性。
3.2在Linc00483组中，mir-508-3p更容易富集。
3.3过度表达的Linc00483降低了宫颈癌细胞中的mir-508-3p水平。
3.4宫颈癌组织中的mir-508-3p水平低于其配对的正常邻近组织，与临床样本中的Linc00483水平呈负相关。
4.宫颈癌细胞中mir-508-3p靶向调控RGS17。
4.1在线软件预测，RGS17是mir-508-3p的潜在下游目标。
4.2mir-508-3p mimics降低了HEK-293T细胞中的荧光素酶活性。
4.3mir-508-3p mimics抑制了宫颈癌细胞中的RGS17表达，mir-508-3p抑制剂增加了宫颈癌细胞中RGS17的表达。
4.4与正常邻近组织相比，RGS17在宫颈癌组织中异常过度表达。
4.5在宫颈癌组织中，mir-508-3p的表达水平与RGS17呈负相关，Linc00483与RGS17呈正相关。
5.Linc00483对宫颈癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响
5.1敲除Linc00483可抑制了宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭，而与mir-508-3p抑制剂协同转染细胞能逆转其增殖。
5.2敲除Linc00483可增加宫颈癌细胞的凋亡率，该结果克通过下调mir-508-3p而消除。
5.3下调的Linc00483对p21、Cyclin-D1、p27、bcl-2、bax、caspase-3、E-cadherin、密码、MMP9、vimentin和MMP2表达水平的影响均被mir-508-3p抑制剂消除。
6.敲除Linc00483可抑制裸鼠宫颈癌细胞瘤的发生
6.1敲除Linc00483可抑制裸鼠的肿瘤体积和重量。
6.2敲除Linc00483可抑制裸鼠肿瘤组织中Ki67、RGS17和Vimentin的表达。
6.3敲除Linc00483可上调裸鼠肿瘤中的mir-508-3p水平，并增加细胞凋亡率。
6.2敲除Linc00483可抑制裸鼠模型的肺转移。
结论：
1.宫颈癌中Linc00483的高表达会促进宫颈癌的发展；
2.宫颈癌中Linc00483通过调节mir-508-3p和RGS17的表达，影响相关蛋白的表达，促进宫颈癌细胞的增殖。
目的：
探索Linc00483在宫颈癌组织及癌细胞系中的表达，分析其和疾病特征的关系、意义及对预后的影响。并探索其在宫颈癌进程中的作用机制，为宫颈癌的临床治疗提供潜在的治疗靶点。
方法：
1.宫颈癌组织和细胞系中Linc00483的表达水平。
1.1通过qRT-PCR测定宫颈癌组织和不同细胞系中Linc00483的相对表达。
1.2通过Kaplan-Meier分析，分析宫颈癌患者总生存率与Linc00483水平之间的相关性。
1.3用RNA-FISH检测宫颈癌细胞中Linc00483的表达和定位。
2..Linc00483对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响。
2.1通过qRT-PCR测定C33A、Siha、Hela和Caski细胞中Linc00483的含量。
2.2采用MTT法检测宫颈癌细胞活力。
2.3采用TUNEL法检测宫颈癌细胞凋亡率。
2.4用Western blot检测宫颈癌细胞中p21、Cyclin-D1、p27、bcl-2、bax、cleaved caspase-3的表达。
2.5用划痕实验检测宫颈癌细胞迁移能力。
2.6采用Transwell法测定宫颈癌细胞侵袭能力。
2.7用Western blot检测宫颈癌细胞中CyclinD1、p21、p27、Bcl-2、Bax、caspase-3、Cleaved caspase-3、MMP2、MMP9、E-cadherin和N-cadherin的表达。
3..Linc00483与mir-508-3p之间的相互作用。
3.1Linc00483与mir-508-3p的结合位点通过在线mirdb软件进行预测，并通过双荧光素酶报告基因系统进行验证。
3.2采用RNA pull down检测Linc00483中的mir-508-3p富集。
3.3通过qRT-PCR测定Linc00483对宫颈癌细胞和组织中mir-508-3p水平的影响。
3.4用pearson分析，分析宫颈癌组织中Linc00483和mir-508-3p的相关性。
4..用mir-508-3p调节RGS17的水平。
4.1利用TARGSCAN、MIRDB、MIR TARBASE等在线软件对mir-508-3p下游靶点进行预测。
4.2用双荧光素酶报告基因系统研究mir-508-3p与RGS17的调控关系。
4.3用qRT-PCR测定宫颈癌组织和宫颈癌细胞中RGS17的mRNA水平。
4.4用Western blot检测宫颈癌组织和宫颈癌细胞中RGS17的表达水平。
4.5用免疫组化法测定RGS17在宫颈癌组织中的表达和定位。
4.6用pearson分析，分析宫颈癌组织中Linc00483、mir-508-3p和RGS17mRNA水平的相关性分析。
5.Linc00483/mir-508-3p轴对宫颈癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。
5.1MTT法检测Hela和Caski细胞增殖。
5.2TUNEL法检测Hela和Caski细胞凋亡。
5.3进行划痕实验以确定Hela和Caski的细胞迁移。
5.4通过Transwell检测Hela和Caski细胞的侵袭。
5.5用Western blot检测Hela和Caski细胞中CyclinD1、p21、p27、Bcl-2、Bax、caspase-3、Cleaved caspase-3、MMP2、MMP9、E-cadherin和N-cadherin的表达。
结果：
1.宫颈癌组织和细胞系中Linc00483的表达水平
1.1与正常组织相比，Linc00483在肿瘤组织中过度表达。
1.2Linc00483的表达水平与宫颈癌患者的总生存率呈负相关。
1.3宫颈癌细胞的Linc00483水平高于永生化宫颈鳞状细胞株（ECT1/E6E7）。
1.4Linc00483在Hela和Siha细胞中高度表达。
2.Linc00483对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响
2.1过度表达的Linc00483促进了宫颈癌细胞的增殖。
2.2敲除Linc00483抑制了宫颈癌细胞的增殖。
2.3过度表达的Linc00483在宫颈癌细胞中上调了Cyclin-D1和bcl-2的表达，下调了p21、p27、bax和caspase-3的表达。
2.4过度表达的Linc00483降低了C33A和Siha细胞的凋亡率。
2.5过度表达的Linc00483增加了宫颈癌细胞迁移。
2.6过度表达的Linc00483增加了宫颈癌细胞的侵袭。
2.7过度表达的Linc00483降低了宫颈癌细胞中E-cadherin的表达，增加了MMP9、Vimentin和MMP2的表达。
3.Linc00483通过结合3UTR区域抑制宫颈癌细胞中的mir-508-3p水平。
3.1mir-508-3p mimics成功地降低了HEK-293T细胞的相对荧光素酶活性。
3.2在Linc00483组中，mir-508-3p更容易富集。
3.3过度表达的Linc00483降低了宫颈癌细胞中的mir-508-3p水平。
3.4宫颈癌组织中的mir-508-3p水平低于其配对的正常邻近组织，与临床样本中的Linc00483水平呈负相关。
4.宫颈癌细胞中mir-508-3p靶向调控RGS17。
4.1在线软件预测，RGS17是mir-508-3p的潜在下游目标。
4.2mir-508-3p mimics降低了HEK-293T细胞中的荧光素酶活性。
4.3mir-508-3p mimics抑制了宫颈癌细胞中的RGS17表达，mir-508-3p抑制剂增加了宫颈癌细胞中RGS17的表达。
4.4与正常邻近组织相比，RGS17在宫颈癌组织中异常过度表达。
4.5在宫颈癌组织中，mir-508-3p的表达水平与RGS17呈负相关，Linc00483与RGS17呈正相关。
5.Linc00483对宫颈癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响
5.1敲除Linc00483可抑制了宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭，而与mir-508-3p抑制剂协同转染细胞能逆转其增殖。
5.2敲除Linc00483可增加宫颈癌细胞的凋亡率，该结果克通过下调mir-508-3p而消除。
5.3下调的Linc00483对p21、Cyclin-D1、p27、bcl-2、bax、caspase-3、E-cadherin、密码、MMP9、vimentin和MMP2表达水平的影响均被mir-508-3p抑制剂消除。
6.敲除Linc00483可抑制裸鼠宫颈癌细胞瘤的发生
6.1敲除Linc00483可抑制裸鼠的肿瘤体积和重量。
6.2敲除Linc00483可抑制裸鼠肿瘤组织中Ki67、RGS17和Vimentin的表达。
6.3敲除Linc00483可上调裸鼠肿瘤中的mir-508-3p水平，并增加细胞凋亡率。
6.2敲除Linc00483可抑制裸鼠模型的肺转移。
结论：
1.宫颈癌中Linc00483的高表达会促进宫颈癌的发展；
2.宫颈癌中Linc00483通过调节mir-508-3p和RGS17的表达，影响相关蛋白的表达，促进宫颈癌细胞的增殖。