类风湿关节炎（rheumatoid arthritis, RA）是T、B淋巴细胞参与的，以损害滑膜、软骨和骨为主的系统性自身免疫疾病。在自身免疫性疾病的发病机制中，免疫调节的异常是疾病发生发展的关键，其中T淋巴细胞的异常增殖活化、各种细胞因子的分泌及Th细胞亚群比例的失衡与疾病的发病及病理损伤密切相关，其在诱导、维持自身免疫耐受性和阻止自身免疫中起重要作用。人参皂苷C-K（ginsenoside compound K, C-K）不仅具有抗突变、抑制癌细胞转移、细胞毒、诱导细胞凋亡、逆转药物耐药和抗肿瘤诱导的血管新生等药理活性外，其抗炎、抗过敏及免疫调节作用也日益受到关注。本研究在建立DBA/1小鼠胶原性关节炎(collagen-induced arthritis, CIA)模型基础上，研究C-K对小鼠CIA的治疗作用，并对其部分作用机制进行了探讨。目的：明确C-K对小鼠CIA的治疗作用，并揭示C-K治疗小鼠CIA作用特点及部分机制。方法：DBA/1小鼠分别d0和d21，尾根部、背部多点皮内注射100μg鸡Ⅱ型胶原乳剂诱导小鼠CIA模型。造模成功的DBA/1小鼠，随机分为8组，即正常组、模型组、C-K组（7,14,28,56,112mg/kg/次，灌胃，每天一次）、MTX组（2mg/kg，灌胃，每三天一次）。d51处死小鼠，观察关节炎指数评分，关节和脾脏病理检查及病理学评分，胸腺指数和脾指数；3H-TdR掺入法观察各给药组对T、B淋巴细胞增殖功能的影响；ELISA法检测培养上清中ELISA法检测体内给药小鼠血清中抗II型胶原（collagen II, CII）抗体、抗环瓜氨酸（cyclic citrulline polypeptide, CCP）抗体、IgG1和IgG2a水平，关节匀浆中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白介素-17（interleukin-17, IL-17）、IL-1β、核因子κB受体活化因子配体（receptor activator for nuclear factor-κB ligand, RANKL）和骨保护素（osteoprotegerin, OPG）水平；流式细胞术检测脾脏T、B淋巴细胞各亚群比率的变化情况，流式细胞术和Western blot共同检测脾脏中TCR、CD28、CTLA-4、PD-1蛋白表达变化。结果:1C-K对CIA小鼠体重和全身表现评分的影响CIA小鼠免疫d3以后，体重增长缓慢，明显轻于正常小鼠。C-K（14,28,56mg/kg）在d32时升高小鼠体重，C-K（14,28,56,112mg/kg）在d35和d41使体重明显恢复，C-K（112mg/kg）在d50轻度升高小鼠体重。CIA小鼠免疫以后，d24开始出现前爪和后爪红肿，并伴有耳部红斑、结节，鼻出现结缔组织等全身表现。d41开始C-K（112mg/kg）对CIA小鼠全身表现评分有逐渐降低作用。2C-K对CIA小鼠关节炎指数和关节肿胀数的影响d24，CIA组小鼠足爪出现较明显红肿逐渐加重。d45开始，C-K（112,56,28mg/kg）先后降低CIA小鼠关节炎指数，C-K（7,14mg/kg）不能明显降低CIA小鼠关节炎指数。d43-d51，C-K（112mg/kg）给药组明显降低升高了的CIA小鼠关节肿胀数；d47-d51，C-K（56,112mg/kg）明显降低小鼠关节肿胀数；d49-51，C-K（14,28,56,112mg/kg）明显降低CIA小鼠关节肿胀数，C-K（7mg/kg）不能降低CIA小鼠关节肿胀数。3C-K对CIA小鼠关节和脾脏病理变化的影响CIA小鼠关节腔可见滑膜组织增生，衬覆多层滑膜细胞，炎性细胞浸润，血管扩张充血，血管翳出现，甚至出现骨和软骨破坏。C-K（56mg/kg）对骨质侵蚀和血管翳的形成有轻度抑制作用；C-K（112mg/kg）对骨质侵蚀、血管翳、炎症和滑膜细胞增殖均有不同程度的改善作用。CIA小鼠脾脏可见白髓增生，表现为蓝染的淋巴细胞聚集区变大，生发中心出现；红髓增生，淤血，范围增大。C-K（56mg/kg）减少生发中心数量；C-K（112mg/kg）显著改善脾脏病理变化，对动脉周围淋巴鞘的细胞密度、淋巴小结增生、边缘区增生和生发中心数量有明显抑制作用。4C-K对CIA小鼠胸腺和脾脏指数的影响与正常组相比，CIA小鼠胸腺和脾脏明显肿大，指数增加。C-K（56,112mg/kg）对脾脏指数有明显抑制作用；C-K各给药组对胸腺指数没有明显影响。5C-K对CIA小鼠脾脏T、B淋巴细胞增反应的影响与正常组相比，ConA诱导的CIA小鼠脾脏T淋巴细胞增殖反应及LPS诱导的CIA小鼠脾脏B淋巴细胞增殖明显增强。C-K各剂量组均可显著抑制ConA诱导的CIA小鼠脾脏T淋巴细胞增殖反应。C-K (28,56,112mg/kg)能够轻度抑制LPS诱导的CIA小鼠脾脏B淋巴细胞增殖。说明C-K对T细胞的作用强于对B细胞的作用，需要进一步实验阐述人参皂苷的作用机制。6C-K对CIA小鼠血清和踝关节匀浆细胞因子水平的影响与正常组相比，CIA小鼠血清IgG1、IgG2a、抗II型胶原抗体和抗CCP抗体水平均明显升高。C-K（28,56,112mg/kg）显著抑制IgG1水平；C-K（14,28,56,112mg/kg）显著降低血清IgG2a含量；C-K（56,112mg/kg）对抗II型胶原抗体的产生有显著抑制作用；C-K各给药组对升高的抗CCP抗体水平没有明显影响。关节匀浆中OPG含量减少，TNF-α、IL-1β、IL-17和RANKL含量显著增多。C-K（56,112mg/kg）降低TNF-α和IL-1β水平，C-K（14,28,56,112mg/kg）不同程度减低关节匀浆中IL-17浓度，C-K（28,56,112mg/kg）可以升高OPG含量。C-K各组对RANKL的高表达没有抑制作用。7C-K对CIA小鼠脾脏T、B细胞亚群的影响选取C-K（28,56,112, mg/kg）三组进一步探讨C-K的作用机制。与正常组比较，CIA组脾脏中未成熟B细胞（CD19+IgM+）、成熟B细胞（CD19+IgD+）、记忆B细胞（CD19+CD27+）的细胞百分含量增加，而调节性B细胞（CD19+CD5+CD1dhi）的细胞百分含量减少。C-K（28,56,112, mg/kg）三剂量组对B细胞各亚群比无明显影响。与正常组比较，CIA组脾脏中总Th细胞（CD3+CD4+）、活化Th细胞（CD4+CD69+）、表达CD40L的活化T细胞（CD4+CD154+）和效应记忆性T细胞（CD4+CD62L-CD44hi）比例均显著升高，未致敏Th细胞（CD4+CD62L+CD44low）和调节性T细胞（CD4+CD25+Foxp3+）比例显著降低。C-K（28,56,112mg/kg）三剂量组能够不同程度的升高未致敏Th细胞和Treg细胞比例，降低活化Th细胞、表达CD40L的活化T细胞和效应记忆性T细胞的比例，对总Th细胞比例无明显影响。8C-K对CIA小鼠脾脏中TCR、CD28、CTLA-4、PD-1蛋白表达的影响与正常组比较，CIA组脾脏中TCR、CD28蛋白表达增加，而CTLA-4、PD-1蛋白的表达降低。C-K（28,56,112mg/kg）三剂量组能够不同程度降低CIA小鼠脾脏中异常升高的共刺激因子TCR、CD28蛋白表达，同时，升高CIA小鼠脾脏中异常降低的共抑制因子CTLA-4、PD-1的表达。结论：1. C-K能够恢复CIA小鼠的体重，能够降低CIA小鼠关节炎指数、关节肿胀数，改善踝关节和脾脏病理变化。C-K小鼠CIA有治疗作用。2. C-K对小鼠CIA的治疗作用与其调节淋巴细胞功能和细胞因子平衡有关。3. C-K抑制CIA小鼠T细胞的异常活化与调控T淋巴活化相关的协同刺激信号分子和协同抑制信号分子平衡有关。