杉木PGPR菌分离筛选及其微生物复合菌肥研制

来源 :中南林业科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xyw6623
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杉木(Cunninghamia lancceolata)是亚热带针叶树种,而且是我国特有的速生针叶用材林树种,栽培区域达16个省市之多,木材产量超过了全国商品用材的25%。然而,杉木人工纯林连栽引起地力严重衰退及生产力下降。虽然通过树种搭配构建混交林能有效缓解林地土壤结构和养分衰减,但仅靠林分优化提高肥力的效果有限,土壤N、P等元素仍然缺乏,严重制约了人工林可持续发展。因此本研究对杉木根际固氮菌、溶磷菌进行筛选,得到高效固氮、解磷菌株;并对其分泌IAA,生理生化等特性进行研究,发酵条件优化,适当比例复配,形成微生物复合菌肥,使用于杉木幼苗,进行肥效检测。主要研究结果如下:(1)采用Ashby培养基筛选杉木根际固氮菌,用乙炔还原测定固氮菌固氮酶活,得到16株固氮能力较强的菌株。利用蒙金娜有机培养基和PKO培养基筛选杉木根际解磷菌,根据透明圈直径(D)/菌落大小(d)的比值,分离筛选出D/d大于1.6的解有机磷和无机磷菌株各12株。筛选出来的固氮菌,溶磷菌用Salkowski(?)匕色法测定IAA分泌量。结果表明:16株菌中有5株固氮酶活性大150nmol·mL-1·h-1,最高的NGJ-4达264.7nmol·mL-1·h-1,NGX-5次之为237.4nmol·mL-1·h-1。大部分菌株都能分泌生长素,有6株菌分泌能力较强IAA浓度大于20mg·L-1,其中NGX-5达35.8、NGJ-3为32.1、NGJ-4为27.8、NGJ-8为27.7(mg·L-1)。溶解有机磷能力最强的是Py16,Py10和Py3(分别为7.131mg/100mL,5.907mg/100mL和6.514mg/100mL);无机磷的是Pw10,Pw6,Pw20分别是23.2mg/100mL,18.59mg/100mL,17.26mg/100mL。分泌IAA最大的是解有机磷菌是Py18,Py16和Py3(分别为38.80mg/L,37.29mg/L和35.79mg/L),无机磷菌是Pw6,Pw8,Pw21(分别是45.340mg/L,39.340mg/L,27.480mg/L)综合考虑最后筛选出NGJ-4,NGX-5和NGJ-8三株固氮菌,Py16,Py3两株解有机磷菌和一株解无机磷菌Pw6这6株菌,在多功能微生物菌肥研制中具有重要开发潜能。(2)对固氮菌和溶磷菌分别做摇瓶发酵条件优化,通过单因子变量和正交试验得到最佳摇瓶发酵条件,固氮菌最适条件为:葡萄糖12g,氯化钠0.2g,碳酸钙5g,磷酸二氢钾0.2g,硫酸镁0.2g,硫酸钙0.2,水1000mL,pH7.2,温度33℃;解无机磷解磷菌最适条件为:葡萄糖10g,磷酸钙3g,硫酸铵0.5g,氯化钠O.1g,硫酸镁0.1g,氯化钾0.2g,硫酸锰0.004g,硫酸亚铁0.002g,酵母膏0.6g,水1000mL,pH7.2,温度30℃;解有机磷解磷菌最适条件为:葡萄糖10g,硫酸铵0.5g,氯化钠0.3g,氯化钾0.3g,硫酸亚铁0.03g,硫酸锰0.03g,碳酸钙,5g酵母膏0.4g,卵磷脂O.1g,水1000mL,pH7.2,温度35℃。最佳摇床培养条件都在160r/min,接种量10%,装液量60mL(250mL三角烧瓶)这样使固氮菌的酶活以及解磷菌的解磷力达到最高。(3)将固氮菌,解有机磷菌和解无机磷菌按最佳发酵条件发酵分别用无菌水稀释,按照不同比例复配,以草木灰和甲壳素为载体施用于0.5年生的杉木苗17株,月增长率为33.9%-90.5%,得到最佳复合生物菌肥配方:固氮菌,解有机磷菌和解无机磷菌稀释成质量百分浓度均为15%,按体积比为1.5:1:1的比例混合搅匀,得到混合菌液;固体载体按照草木灰20%,发酵培养基50%,混合菌液30%。
其他文献
本文通过阳极氧化法制备了聚苯胺(PANI)薄膜,然后采用恒电流阴极还原法,以PANI薄膜为基底,分别制备了阴极材料PANI/Cu_2O和PANI/Cu_2O/Mo S_2,并对制备工艺及影响因素进行了研究。以钛为基底利用阳极氧化制备了TiO_2薄膜,并用PANI对TiO_2薄膜进行电化学修饰,得到阳极材料TiO_2/PANI。采用X射线衍射仪(XRD)、傅立叶红外分析仪、透射电子显微镜(TEM)和
学位
会议
目的:干扰素-γ (IFN-γ)是在特定刺激作用下由细胞产生的一种具有高度生物活性的糖蛋白,在同种动物细胞上具有抗肿瘤和抗病毒活性及广泛的免疫调控作用。内源性的IFN-γ表达