细胞表面α2,3唾液酸对成骨的影响

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目的:探讨细胞表面α2,3唾液酸对成骨的影响和可能的作用机制方法:1.建立MC3T3-E1Subclone14成骨细胞培养模型,倒置显微镜观察细胞形态,RT-PCR和Western-Blot检测成骨细胞相关因子骨钙素、骨唾液酸蛋白等mRNA和蛋白水平的表达,碱性磷酸酶、Von Koss染色以鉴定骨基质和骨矿化的形成。2.在成骨细胞培养模型中加入不同浓度的α2,3神经氨酸苷酶,使用荧光标记的具有识别α2,3唾液酸结构特异性的凝集素MALII检测细胞表面的α2,3唾液酸,并通过流式细胞仪验证效果;同时观察其对成骨功能及相关细胞因子mRNA和蛋白水平的影响和可能的作用机制。结果:1.成功建立了MC3T3-E1Subclone14成骨细胞培养模型,证明MC3T3-E1Subclone14细胞培养至10d左右碱性磷酸酶染色呈强阳性反应,即成骨细胞大量形成,Von kossa染色至14d左右呈强阳性反应,说明成骨细胞分泌的骨基质进入矿化期。2.利用流式细胞仪验证荧光标记的凝集素MALII能有效结合细胞表面的α2,3唾液酸;细胞表面α2,3唾液酸对成骨细胞无明显的影响,但对骨矿化有一定的影响。它可能通过影响维生素D受体VDR的表达,从而影响骨的矿化,但对成骨细胞分化无明显影响。综上所述,我们成功建立了MC3T3-E1Subclone14成骨细胞培养模型;证实细胞表面α2,3唾液酸主要影响骨的矿化,但对成骨细胞无明显影响。它可能通过影响维生素D受体VDR的表达,从而影响骨的矿化。
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