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川硬皮肿腿蜂(Sclerodermus sichuanensis Xiao)隶属于膜翅目(Hymenoptera)肿腿蜂科(Bethylidae),是松墨天牛(Monochamus alternatus Hope)和杉棕天牛(Callidium villosulum Fairmaire)等钻蛀性害虫的抑性外寄生蜂。川硬皮肿腿蜂雌蜂生殖系统较简单,毒囊体积所占比例大,无明显萼区,毒液在川硬皮肿腿蜂和寄主昆虫相互关系中起重要作用。为揭示川硬皮肿腿蜂寄生对寄主黄粉虫(Tenebrio molitorL.)蛹的调控机制及麻痹机制,本文通过自然寄生、毒液注射、Sephadex G75层析和PCR等方法研究了寄生过程中毒液的作用,并对毒液中一种麻痹蛋白进行分离纯化,对两种毒液蛋白克隆进行了初步探索。主要结果如下:1.川硬皮肿腿蜂麻痹寄主黄粉虫蛹花费的时间约为0.5-3 h;在一定范围内,寄主蛹被接种成年雌蜂比例越大,被蛰刺的次数与被自然注射毒液量越大,麻痹程度越明显(正相关);人工注射川硬皮肿腿蜂毒液的寄主蛹会被毒液麻痹;在一定范围内,人工注射寄生蜂毒液量越大,寄主蛹被麻痹的程度越明显(正相关),恢复活动程度越不明显(负相关)。2.川硬皮肿腿蜂毒液具有抑菌、延缓黑化和麻痹三种作用。其中,麻痹作用的活性物质是蛋白质;毒液对大肠杆菌(Escherichia coli)和金黄葡萄球菌(Staphyloccocus aureus Rosenbach)都有抑制生长作用,且对金黄葡萄球菌的抑制作用高于大肠杆菌。3.温度对川硬皮肿腿蜂毒液的麻痹活性和抑菌性都有影响。40℃以后,随着温度升高,寄生蜂毒液麻痹活性降低,直至60℃麻痹活性完全消失;对大肠杆菌的抑制作用在40-C后升高,50-C以后没有变化;对金黄葡萄球菌的抑制作用在60℃时降低,之后随着温度升高抑制作用消失。4.川硬皮肿腿蜂毒液中存在vpr 1~6 (venom protein 1-6)6种大分子毒液蛋白,这6种大分子蛋白经p-巯基乙醇分解二硫键后可以形成vpr Ⅰ~Ⅸ (venom proteinI~Ⅸ)9条大分子肽链;所有肽链相对分子量均分布于6.5-200 KDa之间,分别为vpr Ⅰ 187.83 KDa, vpr Ⅱ 88.73 KDa, vpr Ⅲ 68.33 KDa, vpr Ⅳ 59.40 KDa, vpr V 38.23 KDa, vpr VI 27.30 KDa, vpr Ⅶ 16.89 KDa, vpr Ⅷ 14.13 KDa, vpr IX 12.94 KDa。5.川硬皮肿腿蜂毒液中的毒液大分子蛋白vpr 4具有麻痹活性,且毒液大分子蛋白vpr 4能被p-巯基乙醇分解成了两条肽链(vpr V, vpr Ⅸ),即vpr4相对分子质量为vpr V和vprⅨ的相对分子质量之和,约为51.17 KDa。6.毒液大分子蛋白vpr 4麻痹作用不均衡,其轻微麻痹活性极显著高于0.03 VRE的毒液,但与0.05 VRE的毒液差异不显著;完全麻痹活性极显著高于0.03 VRE,极显著低于0.05 VRE;恢复活动活性极显著低于0.03 VRE,极显著高于0.05 VRE。7.川硬皮肿腿蜂鲜活样品总DNA不易降解,易于提取;麻痹蛋白核心片段克隆最佳退火温度为54℃,丝氨酸蛋白酶核心片段的最佳退火温度为52℃。