山西红芸豆根腐病病原菌种群结构及根际土壤微生物多样性分析

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山西省是我国红芸豆(Phaseolus vulgaris)主产区之一,红芸豆出口量占全国芸豆总出口量的50%以上。由于常年连作,根腐病的发生日益严重,严重制约了我省红芸豆产业的发展。明确红芸豆根腐病病原菌种类及发生规律是制定有效防控措施的基础,因此本文对山西省红芸豆根腐病病原菌种群结构、根腐病发生与红芸豆根际微生物多样性的关系进行了研究,主要结果如下:1.于2018年、2019年对山西省红芸豆种植区根腐病进行了调查,发现该病在岢岚县、静乐县、阳曲县、岚县、宁武县、代县、神池县、五寨县、原平市等地均有发生,田间发病率普遍在10%~50%之间,严重田块发病率可达80%。采用多点取样法采集根腐病病株171份。2.通过组织分离、单孢纯化共获得302个菌株。通过形态学鉴定及r DNA-ITS序列分析,共鉴定出尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、木贼镰刀菌(F.equiseti)、链格孢属(Alternaria sp.)、腐皮镰刀菌(F.solani)、粉红粘帚霉(Clonostachys rosea)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、三线镰刀菌(F.tricinctum)、层出镰刀菌(F.proliferatum)、芬芳镰刀菌(F.redolens)、炭疽菌属(Colletotrichum sp.)、蠕孢属(Bipolaris sp.)、新月弯孢霉(Curvularia lunata)、茎点霉属(Phoma sp.)、厚垣镰孢菌(F.chlamydosporum)、变红镰刀菌(F.incarnatum)共15种真菌。分别挑选代表菌株,通过麦粒砂拌土接种法进行致病性测定,结果表明,15种真菌均有致病性,接种后植株发病率在8.33%~100%之间。立枯丝核菌J4-1.4菌株接种后发病率为100%,致病力最强。芬芳镰刀菌、茎点霉属、蠕孢属能够引起红芸豆根腐病在国内属首次报道。3.302个菌株中,尖孢镰刀菌有171株,占总菌株数的56.62%,为优势菌群。变红镰刀菌、厚垣镰刀菌、蠕孢属、茎点霉属只在岢岚县病株中分离到,新月弯孢霉只在静乐县分离到。在同一病株上分离到3种或3种以上病原菌、2种病原菌和1种病原菌的情况分别占比为43.86%、29.82%、26.32%。4.对主要病原菌的生物学特性进行测定,供试菌株在10~30℃范围内均能生长。尖孢镰刀菌、芬芳镰刀菌、茎点霉属菌丝生长最适温度为25℃,立枯丝核菌为20℃,蠕孢属为25~30℃,木贼镰刀菌菌丝生长最适温度为30℃。供试菌株菌丝生长均偏好全光照、偏碱性条件。葡萄糖和麦芽糖为尖孢镰刀菌菌丝生长的最适碳源;麦芽糖为茎点霉属和立丝核菌菌丝生长的最适碳源;除麦芽糖外,其它碳源对芬芳镰刀菌菌丝生长均具有显著抑制作用;供试碳源对木贼镰刀菌、蠕孢属菌丝生长均表现为抑制。供试氮源对尖孢镰刀菌、茎点霉属和立枯丝核菌菌丝生长均表现抑制;蠕孢属菌丝生长受供试氮源影响较小;甘氨酸为木贼镰刀菌菌丝生长的最适氮源,硝酸钠为芬芳镰刀菌菌丝生长的最适氮源。5.采用高通量测序法对红芸豆播种前土壤、根腐病发生土壤、未发病土壤的微生物多样性、丰富度、群落组成及其与土壤理化因子之间的关系进行了分析。结果表明根腐病发生土壤细菌群落多样性和丰富度在种植前、始花期和成熟期3个阶段呈先下降后升高的趋势;未发病土壤细菌丰富度和多样性在这三个时期不发生显著变化。根腐病发生土壤和未发病土壤真菌多样性和丰富度在种植前、始花期和成熟期3个阶段均不存在显著差异。对始花期根腐病发生土壤和未发病土壤的物种差异进行分析,结果表明,始花期,细菌菌属中链霉菌属、芽孢杆菌属、根瘤菌属、噬几丁质菌属等生防菌株在根腐病发生土壤中显著增加;真菌菌属中,未发病土壤中绿僵菌属、腐质霉属、被孢霉属、毛壳菌属明显积累,根腐病发生土壤中镰刀菌属和茎点霉属真菌含量显著高于未发病土壤。理化因子相关性分析结果表明,土壤中全磷含量与链霉菌属和根瘤菌属丰度呈正相关关系而与镰刀菌属呈负相关。碱解氮含量与腐质霉属、毛壳菌属丰度呈正相关而与镰刀菌属呈负相关。
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