表面增强红外光谱在研究界面氧化还原蛋白电子传递机理中的应用

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近三十年来,表面增强红外光谱(Surface-Enhanced InfraredAbsorption Spectroscopy,SEIRAS)由于具有较高的灵敏度和简单的表面选律,在从分子水平上更深入直观地揭示蛋白质的结构和性质中做出极大贡献。SEIRAS与电化学结合方法可以在电化学调制的同时对体系的红外吸收光谱变化进行实时原位检测,已经成为SEIRAS应用最广泛的方法,也是一种研究氧化还原蛋白质电子传递机理的有力手段。受限于SEIRAS的增强因子(101~103),应用SEIRAS从分子水平上研究单层膜上膜蛋白质的结构和功能还不广泛适用。因此提高SEIRAS的增强因子成为其发展中必须解决的问题。本文利用SEIRAS,展开了以下三方面的研究工作:1.利用SEIRAS原位检测、对比了吸附在裸Au表面和MUA/Au表面的细胞色素C(Cyt c)的吸附过程红外光谱和氧化还原作用诱导的SEIDAS。揭示了阻碍吸附在裸Au电极上Cyt c电子转移的不是由于结构变化导致的蛋白质变性,而是由于蛋白质的不同吸附取向和受限旋转。2.利用金纳米粒子良好的生物相容性和导电性,在电极上构建了一种金纳米粒子-蛋白质-金纳米单分子岛状薄膜的三明治结构,利用SEIRAS原位检测了吸附金纳米粒子前后,Cyt c的氧化还原作用诱导的SEIDAS的区别,从分子水平上研究了金纳米粒子介导的Cyt c直接电子转移过程机理。证明金纳米粒子的组装会影响到Cyt c电子传递中心血红素的电子传递而明显改善了蛋白质的电子传递特性。3.构建了一种金属-分子-金属的三明治结构,该结构增加了探针的光谱强度,在SEIRAS对信号强度扩大100倍的基础上,额外增强因子约为6。并且从电磁场增强机理和化学增强机理两个方面推测了其增强机理,其中电磁场增强机理是主要因素。
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