禽腺病毒（Fowl adenovirus,FAd V）可以导致一系列综合症状发生,包括包涵体肝炎（Inclusion body hepatitis,IBH）、心包积液综合征（Hydropericardium syndrome,HPS）等,对全球的家禽养殖业带来了巨大的经济损失。禽腺病毒属于腺病毒科、禽腺病毒属,无囊膜的双股DNA病毒。根据最新的分类方法,腺病毒科分为6个属,其中3个属可以导致禽类的疾病,分别是:禽腺病毒属、唾液腺病毒属和腺胸腺病毒属。禽腺病毒属可分为16个种,其中5种可以引起鸡的相关疾病。5个种被分为12个血清型,用字母A～E表示,A种为血清1型禽腺病毒（FAd V-1）,B种为血清5型（FAd V-5）,C种为血清4型（FAd V-4）和血清10型（FAd V-10）,D种为血清2型（FAd V-2）、血清3型（FAd V-3）、血清9型（FAd V-9）和血清11型（FAd V-11）,E种为血清6型（FAd V-6）、血清7型（FAd V-7）、血清8a型（FAd V-8a）和血清8b型（FAd V-8b）。2015年以来,禽腺病毒在世界各国内开始暴发流行。2015年5月,我国的禽腺病毒开始在北方地区爆发,家禽养殖业遭受了巨大的经济损失。在国内检测到的FAd V毒株主要为FAd V-4、FAd V-8a、FAd V-8b。FAd V-4引起家禽的心包积液综合征,在商品肉鸡中死亡率可高达80%,但在蛋鸡群中死亡率最高只有40%。FAd V-8a和FAd V-8b可引起包涵体肝炎,可导致免疫力下降,生产性能下降,甚至死亡。近年来,FAd V-8a和FAd V-8b在我国逐渐流行,3～5周龄的肉鸡感染后死亡率可高达30%。目前国内已有多种商业化的FAd V-4油乳剂灭活苗在市场中销售,FAd V-8b的商业化油乳剂灭活苗也处于审核中,但FAd V-8a尚无商品化的油乳剂疫苗研制,并且由于FAd V血清型众多,各血清型间的交叉保护力较弱甚至没有,FAd V-8a血清型的商品化疫苗的研制对于国内家禽养殖业具有重要的经济应用价值。本试验从山东潍坊的商品肉鸡养殖场中得到一份疑似包涵体肝炎发病鸡群的病料,通过鸡胚接种的方法成功分离出一株FAd V-8a毒株,对其Hexon基因测序后与进行核苷酸序列同源性比对,并绘制了系统发育树和同源性比对表,并命名为FAd V-8a-CY21。同时以8a-CY21为标准品建立了FAd V-8a的荧光定量PCR检测方法,可检测的最小核酸浓度为为4拷贝/μL,其灵敏度为常规PCR的100倍,组内与组间的重复性良好,变异系数均不超过2%,与禽腺病毒其他血清型、禽流感、新城疫、呼肠孤病毒病等常见病的核酸无交叉反应。随后将8a-CY21接种于鸡肝癌细胞（LMH细胞）上传代培养,通过肌肉注射的途径人工感染23日龄无特异性病原体（SPF）鸡,攻毒剂量为0.3m L(TCID50为107.0/0.1m L)每只,评估该毒株的致病性,并通过荧光定量PCR检测FAd V-8a在动物体内的分布情况,结果表明病毒广泛分布于各个器官当中,在攻毒后第6 d病毒含量达到峰值,肝脏肿胀边缘钝圆,整体呈土黄色,表面有出血点,质脆易碎,病毒载量结果显示十二指肠中的病毒含量最高,达4×103.0拷贝/μL,在试验过程中没有鸡只死亡。用2‰甲醛灭活LMH细胞培养病毒液,置于37℃中灭活24h,将水相与油相1:3混合后制成油乳剂灭活苗。将成品按照《中国兽药典》进行灭活检验、安全性检验、稳定性检验和无菌检验,结果表明本试验制备的疫苗各项指标均达到标准。SPF鸡在经肌肉注射接种灭活苗后第21 d抗体水平达到峰值,抗体滴度平均为7000titer。肌肉注射FAd V-8a攻毒检测灭活苗的保护效力结果表明,免疫组器官眼观无病变,PCR未检测出病毒DNA;攻毒对照组精神沉郁,肝脏出现病变,采集每组泄殖腔拭子检测排毒量,免疫组低于攻毒对照组,且差异显著。毒价达到106.5TCID50/0.1m L时可以完全阻止试验鸡排毒。本研究在山东潍坊地区分离到一株FAd V-8a毒株,对其进行致病性进行评估,建立攻毒保护模型,同时建立荧光定量PCR检测方法,测定制备的FAd V-8a油乳剂灭活苗的保护效力,为国内FAd V-8a疫苗的制备提供了相关数据,该疫苗有望成为预防和减少包涵体肝炎在国内传播的候选药物。