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诺如病毒是引起人类非细菌性胃肠炎的主要病原之一,可导致严重的公共卫生问题。诺如病毒具有很高的传染性和变异性,可以使各年龄段的人引发急性胃肠炎,尤其在抵抗力弱的人群中有很高的发病率,因此快速、尽早地确诊对预防和控制诺如病毒的传播是非常重要的。近年来对诺如病毒的研究,多是采用表达全长ORF2所编码的衣壳蛋白,制备单克隆抗体,再通过ELISA等方法进行检测,其对单一基因型诺如病毒的检测无疑是准确的,却无法同时确定多个基因型别的样品,这限制了其在检测中的应用。多表位抗原基因是运用重组DNA技术将多个编码抗原表位的核苷酸片段串连组合起来构成,其在HIV、CSFV和结核杆菌等方面的研究已经取得突破性进展,然而目前对诺如病毒多表位抗原基因的研究还未见报道。本论文通过化学合成、PCR扩增和酶切连接相结合的方法将4段S区表位序列进行串联,在原核表达系统中诱导表达得到重组融合蛋白;用纯化得到的重组融合蛋白免疫兔子,获得兔抗NoV多克隆抗体;利用制备的兔抗NoV多克隆抗体包被磁珠,获得免疫磁珠,应用免疫磁珠对诺如病毒颗粒进行富集研究,得到以下结果:(1)根据已经发表文献中表位信息,选择诺如病毒衣壳蛋白靠近N端S区的3个表位,通过化学合成的方法得到NoV多表位抗原基因前段基因片段A;结合本实验室前期的研究内容和NCBI中提供的序列信息,根据S区设计引物,以编号1004株诺如病毒cDNA为模板,扩增得到NoV多表位抗原基因后段基因片段B;将A和B连接起来构建了诺如病毒多表位抗原基因,核苷酸长438bp,共编码145个氨基酸,并将其与表达质粒pET-32a(+)连接,转化到BL21(DE3)中进行原核表达,得到34kDa的重组融合蛋白。30°C诱导6h后,经SDS-PAGE分析,目的蛋白占全菌总蛋白的35%左右,并且大部分为可溶性蛋白,利用亲和层析方法纯化得到重组融合蛋白。(2)将纯化得到的重组融合蛋白浓缩后加入免疫佐剂免疫兔子,经5次免疫后,心脏采血获得抗血清,用辛酸-硫酸铵盐析法纯化多克隆抗体,间接ELISA法测定抗体效价为1:51200。(3)将兔抗NoV多克隆抗体包被磁珠,对磁珠与抗体偶联条件进行优化,优化后的条件为:最佳包被介质为PBS,最佳pH为7.4,最佳包被时间为3h,最佳包被温度为20°C,最佳抗体浓度为300μg/mL。用制备的免疫磁珠对肛拭子中诺如病毒进行富集研究,提取富集前后的病毒RNA,并用实时荧光定量PCR方法检测,结果表明富集后的诺如病毒检测结果均为阳性,免疫磁珠对GI、GII型诺如病毒都有吸附效果,制备的多克隆抗体能很好的与诺如病毒颗粒产生特异性结合。