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细胞外微环境的仿生构建是组织工程和再生医学的研究焦点,对细胞的增殖、迁移及其功能表达都起着重要的调节作用。近年利用基因重组技术制备的多功能融合蛋白细胞外基质与纳米纤维三维细胞支架的研究已引起研究者的广泛关注。本文旨在拟开发内皮细胞粘附因子型融合蛋白细胞外基质,并用于纳米纤维支架的表面改性,改善纳米纤维血管支架的内皮细胞特异亲和性,研究其促进内皮细胞的选择性粘附与增殖的作用,为细胞外微环境的仿生构建提供一定的理论与实践指导。
本文利用水接触角实验检测了VE-cad-Fc对聚苯乙烯表面亲水性的影响,结果表明通过Fc功能域与疏水材料表面的疏水作用,VE-cad-Fc稳定地吸附在疏水材料聚苯乙烯表面,并且显著提高了聚苯乙烯表面的亲水性。VE-cad-Fc基质用于人脐静脉内皮细胞(HUVEC)培养,MTT法检测细胞粘附、增殖结果表明:融合蛋白VE-cad-Fc浓度为5μg/ml时,形成的人工细胞外基质最适合内皮细胞的生长,且该基质能显著地提高内皮细胞的选择性粘附及其增殖,同时这种基质对内皮细胞的粘附具有钙离子依赖性。此外,细胞骨架与免疫组化染色实验表明融合蛋白VE-cad-Fc基质能促进HUVEC伸展,表达大量应力纤维(F-actin)并形成丝状伪足,同时能显著地提高内皮细胞功能性分子(vWF、VE-cadherin)的表达。为了进一步促进血管纳米纤维支架的快速内皮化,论文中我们通过控制静电纺丝过程中的电纺制备条件参数,成功地制备了纤维直径均一、孔隙均匀、厚度可控的PCL纳米纤维支架。根据上述蛋白固定方法,VE-cad-Fc对PCL纳米纤维支架进行了表面改性。MTT法检测表明,经VE-cad-Fc修饰的PCL纳米纤维支架可以显著提高内皮细胞的粘附与增殖。细胞骨架与免疫组化染色实验表明VE-cad-Fc能促进内皮细胞的延伸,同时内皮细胞功能性分子(vWF)的表达量明显提高。该研究结果表明,在VE-cad-Fc与纳米纤维协同作用下,VE-Cad-Fc改性PCL纳米纤维支架有望成为诱导血管支架材料表面快速内皮化、改善支架血液相容性的有效技术手段。