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研究背景:脉络膜新生血管(CNV)是多达四十余种眼部疾病的共同病理过程,严重影响中心视力,是眼部新生血管的重要特征之一。CNV的生成包括血管生成和血管发生两种形式,造成视网膜、脉络膜组织相对缺氧缺血,新生血管的形成。其中血管发生指原位血管细胞参与一系列的增生、移行形成新生血管,而血管生成指中胚层成血管细胞分化的内皮细胞(ECs)或骨髓来源细胞(BMCs)分化的血管细胞参与形成新血管的过程。CNV生长的前提条件是:基底膜与细胞外基质(ECM)的分解,该处的血管内皮细胞(VEC)才能分裂增殖形成幼芽,继而发展生成CNV。CNV细胞外基质的主要成分包含I、III、IV、V型胶原。而CNV基底膜的主要成分是IV型胶原。此外,炎症、缺氧和应激损伤等多种因素,均可影响CNV的发生与发展。我组前期研究表明,BMCs可特异性地在CNV处聚集、增殖和分化为VEC、巨噬细胞(Mφ)、上皮细胞(epithelial cells)、血管平滑肌细胞(VSMC)和成纤维细胞(fibroblasts)等血管壁的构成成分,同时还可分泌促血管生成因子如血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子(TGF)-β和碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)等参与CNV的生成过程。在诱发损伤后,BMCs向CNV区域迅速而特异的趋化,在CNV的起始期即可趋化至病变部位,而不停留于其他正常组织器官。BMCs在新生血管形成中的作用为眼部新生血管的治疗提供了新的前景。一方面可通过干预BMCs控制血管的发生,另一方面也可将BMCs作为载体,将治疗所需要的药物带到需要治疗的新生血管的部位,起到靶向治疗作用。基质金属蛋白酶(MMPs)是CNV生成所必需的,可广泛降解血管基底膜和ECM,是血管细胞移行出芽、BMCs趋化参与新生血管形成的前提条件。基质金属蛋白酶-2/-13(MMP-2/-13)在CNV生成过程中发挥重要作用。其中MMP-13可以降解I型和III型胶原,MMP-2可以降解IV型和V型胶原。但CNV原位细胞表达MMP-2/MMP-13有限。BMCs参与CNV生成,是CNV细胞成分中除原位细胞外另一主要来源,可能是CNV中MMP-2/MMP-13的重要来源,而微小RNA188-5p(mi R188-5p)可能是调控BMCs表达MMP-2/MMP-13的关键节点。目的:探讨参与CNV生成的BMCs表达MMP-2/MMP-13的情况及BMCs表达的MMP-2/MMP-13是否与mi R188-5p具有某种关系,从而影响CNV发展。方法:将绿色荧光蛋白(GFP)转基因小鼠骨髓细胞移植给野生型C57BL/6J小鼠建立嵌合体,流式细胞术检测嵌合度大于85%者纳入后续实验。激光诱发嵌合体小鼠(实验组)和野生型小鼠(对照组)CNV。利用组织ELISA、Western Blot和明胶酶谱观察激光诱发CNV后第1、3、5、7、10、14、28天MMP-2/MMP-13的动态表达及活性;q RT-PCR观察激光诱发CNV后第1、3、5、7、10、14、28天mi R188-5p的表达;免疫荧光染色和原位杂交分别观察CNV中GFP阳性细胞(即移植的骨髓细胞)是否表达MMP-2/MMP-13和mi R188-5p,并进行定量分析。结果:组织ELISA显示对照组与实验组MMP-2/MMP-13总体表达趋势一致(两因素方差分析MMP-2:F分组=0.060,p=0.810;MMP-13:F分组=0.012,p=0.915)。组织ELISA、Western Blot、明胶酶谱和免疫荧光均显示MMP-2在诱发CNV早期就开始快速增加,到CNV第3天时表达量及活性最高,其中BMCs表达MMP-2的量也在此时达到高峰,占总表达量的64.21%,随后MMP-2总体表达开始下降。MMP-13在CNV早期缓慢增加,到CNV第7天时表达量及活性最高,此时BMCs表达MMP-13的量也达最高,占总表达量的79.61%,随后MMP-13总体表达开始下降。靶基因预测结果显示MMP-2和MMP-13的3′非编码区有mi R188-5p的互补结合位点。q RT-PCR和原位杂交结果均显示在CNV早期时,mi R188-5p快速下降,到CNV第7天时表达量最低,随后开始上升。小鼠CNV区BMCs中mi R188-5p的动态表达与BMCs中MMP-13的动态表达呈负相关(r=-0.868,p<0.05);CNV诱导后前5d内BMCs内的mi R188-5p的动态表达与BMCs中MMP-2的动态表达呈负相关(r=-0.997,p<0.05)。结论:在激光诱导的小鼠CNV模型中,MMP-2/MMP-13的表达随时间发生动态变化,BMCs对其表达的迅速上调起主要作用。CNV区BMCs中mi R188-5p的表达亦随时间变化,其变化趋势与MMP-13表达变化呈负相关,而与MMP-2早期表达变化呈负相关。且mi R188-5p的调控靶基因是MMP-2/MMP-13,提示mi R188-5p可能通过下调BMCs表达的MMP-2/MMP-13从而抑制CNV的发生发展。