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背景及目的:膜性肾病(Membranous nephropathy, MN)是一种自身免疫异常所致的原发性肾脏病,其发病机制尚不明确。目前已有研究证实,抗M型磷脂酶A2受体抗体(Anti-M-type Phospholipase A2 Receptor,Anti-PLA2R)是 70%左右的膜性肾病患者血液中的特异性自身抗体,但是自身抗体如何对肾小球局部产生影响,从而导致膜性肾病患者肾脏的病理生理变化仍不清楚。我们推测,细胞因子等参与细胞间信号传递的活跃小分子低丰度蛋白质在膜性肾病的发病机制中起着至关重要的作用。蛋白质组学的相关研究技术目前主要分为两大类,一类是质谱技术,另一类为蛋白质芯片技术。因肾组织中的小分子低丰度蛋白质的响应值常难以达到质谱的检测低限,故本研究采用蛋白质芯片技术。本研究旨在利用合适的蛋白质芯片技术筛选膜性肾病肾脏组织中的小分子低丰度蛋白质,寻找并阐述可能参与膜性肾病发病的信号通路途径,为深入研究膜性肾病的发病机制奠定基础。材料及方法:(1)为寻找适合于肾脏组织检测的蛋白质芯片,本研究第一部分使用分别使用三种芯片——定量芯片QAH-INF-3和半定量芯片L-493及L-507对正常肾脏组织进行检测并评价其可用性。正常肾脏组织来源于肾细胞癌患者手术切除后的癌旁正常肾脏组织。研究使用三种芯片分别对同一样本的2:1倍比稀释液进行检测,将所测得倍比稀释样品的信号值比介于1.3-3.0之间的蛋白质定义为可检测蛋白质,通过三种芯片所测得的可检测蛋白质的数量及比例来评价芯片的可用性。(2)本研究第一部分发现芯片L-493更适合于肾脏组织小分子低丰度蛋白质的检测,在第二部分中,使用芯片L-493分别对3例膜性肾病肾脏组织与3例正常肾脏组织进行检测。将所测MN/N信号值比>1.35的蛋白质定义为差异蛋白质,对差异蛋白质进行一系列生物信息学分析,并筛选与膜性肾病发病相关的细胞信号转导途径。使用酶联免疫反应吸附试验(Enzyme - linked immunosorbent assay, ELISA)及免疫组织化学染色方法(Immunohistochemical staining, IHC)对上调表达倍数较高的蛋白质CTSD, EpCAM, ADAMTS-4 及 CD46 等进行验证。结果及结论:(1)芯片可用性评价:芯片QAH-INF-3的可检测蛋白质共9种(22.5%),芯片L-507中的可检测蛋白质共61种(12.03%),芯片L-493的可检测蛋白质共214种(43.41%)。芯片L-493的可检测蛋白质的种类及数量均最多,更适合用来检测肾脏组织中的小分子低丰度蛋白质。(2)膜性肾病差异蛋白质检测分析:芯片L-493共检测到膜性肾病差异蛋白质66种,基因本体(Gene ontology, GO)分析与蛋白质间相互关系(Protein-protein interaction,PPI)分析发现了多种可能与膜性肾病相关的信号通路,例如免疫活化、细胞代谢、细胞粘附、细胞信号转导及细胞外基质重构等。进一步分析发现许多蛋白质的功能多样化,在各信号通路间扮演“枢纽”蛋白质的角色,将不同蛋白质功能区联系起来构成了一张蛋白质网络,蛋白质及各条通路途径之间进行相互作用,共同促进了膜性肾病的发生发展。