论文部分内容阅读
本研究运用RT-PCR方法，完成了广西首株猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus，PRRSV)GXA株的全基因组序列的测定，结果显示GXA株基因组全长为15422nt，包括10nt的polyA尾。通过分析证实GXA株全基因与VR-2332、RespPRRSMLV、BJ-4的同源性最高分别为98.4％、98.6％、98.6％，与高致病性PRRSV毒株同源性为88％-89.9％，与欧洲型LV株的同源性为58.3％，因此在分子水平上证实了GXA株为经典美洲型PRRSV毒株。其5’UTR、3’UTR与RespPRRSMLV株同源性为100％，非结构蛋白NSP2不存在30个氨基酸的缺失；结构蛋白的糖基化位点均与RespPRRSMLV株一致；推测的9个与毒力相关的氨基酸位点均与RespPRRSMLV株相同，因此GXA株可能来源于弱毒疫苗RespPRRSMLV株。遗传进化分析显示，我国PRRSV毒株可以分为4个亚型，GXA归属于1亚型，此型与疫苗株RespPRRSMLV高度同源。
致病性实验结果证实，攻毒猪没有出现有发热、呼吸困难、精神沉郁、死亡等高致病性PRRSV感染时出现的临床症状；病毒血症维持的时间较短，但是能够产生较高的抗体水平；剖杀后病理变化不明显，内脏器官病毒核酸检出率低，因此推测GXA株为PRRSV弱毒株。
本研究另外运用RT-PCR方法从广西部分市县收集的病料中成功的克隆了19株PRRSV的NSP2部分基因及18株PRRSV的ORF5基因。将19株PRRSVNSP2部分基因与广西2006-2008年的PRRSVNSP2部分基因序列及国内外代表毒株建立遗传进化树发现广西PRRSVNSP2基因又可以划分为5个分支。本研究新发现一株GXBB-12010除536-565处29个氨基酸缺失外在470-505位另有35位氨基酸的缺失，NSP2“35+29”型氨基酸的不连续缺失，这种特征的毒株为广西境内首次发现。
将18株PRRSV的ORF5基因与广西2002-2008年的PRRSVORF5基因序列及国内外代表毒株建立遗传进化树发现广西PRRSVORF5基因可以划分为8个亚型，其中Ⅷ哑型主要来源于2006年以后且与JXA1、HuN4同源性较高，其余亚型主要来源2006年以前，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ与VR2332、MLV同源关系较高，Ⅳ、V、Ⅵ、Ⅶ与CH-1a、HB-2(sh)/2002同源性较高。各个亚型主要变化表现为：(1)毒力决定位点13和151位氨基酸的改变；(2)33-35位糖基化位点数目的增多，且有向C端移动的趋势；(3)中和表位序列第39位氨基酸的突变。