论文部分内容阅读
目的:构建aptamer介导的载紫杉醇聚乳酸/乙醇酸-聚乙二醇共聚物(PEG-PLGA)纳米粒靶向递释系统，研究其对实验性鼠胶质瘤的抗癌效果。 方法:通过荧光显微镜观察验证aptamer与大鼠脑胶质瘤细胞的亲和性。采用碳二亚胺法合成了PLGA-PEG共聚物并进行氢核磁共振谱表征。采用乳化/溶剂挥发法制备了载紫杉醇的PLGA-PEG纳米粒，以L9(34)正交试验筛选最优制备方法，采用碳二亚胺法将aptamer连接到纳米粒表面，并用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行验证，并对其作了粒径、电性和体外释放度表征。采用噻唑蓝比色法测定了紫杉醇注射剂、纳米粒和aptamer修饰纳米粒对大鼠脑胶质瘤细胞的毒性。采用液相色谱-质谱联用方法测定紫杉醇注射剂、纳米粒和aptamer修饰纳米粒在大鼠体内的药物动力学参数。采用尾静脉注射多剂量重复给药，以肿瘤生长抑制实验和生存期评价紫杉醇注射剂、纳米粒和aptamer修饰纳米粒的抗肿瘤作用。 结果:aptamer与C6的亲和随着aptamer浓度的增高（0.05、0.25和1.25 pmol·μl-1）与孵育时间（5、15、30和60 min）的延长而增强。以摩尔比PLGA∶PEG=1∶1，两步反应时间分别为4和12h合成的PLGA-PEG共聚物数均分子量约为22，800，PEG连接率为25％，产率44％。最优制备方法为超声功率180 W，时间30 Sec，投药量2％，胆酸钠总体积12 ml，得到的纳米粒强度粒径112nm，电位为-23.70 mV，包封率为49.6％，在PH7.4磷酸盐缓冲液和空白血浆中紫杉醇从纳米粒中的释放相似，24 h有45％的药量突释，之后缓慢释放。约有70％的aptamer连接到纳米粒表面，形成的aptamer修饰纳米粒粒径为156 nm，电位为-32.93 mV，在PH7.4磷酸盐缓冲液和空白血浆中的体外释放度与不修饰纳米粒没有显著性差异。细胞存活率随紫杉醇浓度的增高（0.038、0.38、0.76、3.8、12和24μg·ml-1）和孵育时间（24、48和96 h）的延长而降低。24、48和96 h时aptamer修饰纳米粒的半数抑制浓度IC50分别是注射剂的2.59、4.18和4.67倍，是纳米粒的2.92、3.32和2.67倍。紫杉醇注射剂、纳米粒和aptamer修饰纳米粒在大鼠血浆中的消除半衰期t1/2β分别为1.79、5.43和4.16 h，AUC分别为918.78、5351.30和4982.11μg·L-1h-1。肿瘤生长体积aptamer修饰纳米粒组＜纳米粒组＜注射剂组＜生理盐水组，20天时肿瘤体积依次为0.107、0.193、0.311和0.584cm3，中位生存期分别为31、27、24和18天。 结论:aptamer介导的载紫杉醇PEG-PLGA纳米粒递释系统，对鼠胶质瘤的治疗效果比注射剂和不修饰纳米粒有显著性提高，可为抗肿瘤药物的靶向治疗的研究提供实验方法和相关理论。