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猪圆环病毒2型(PCV2)是引起猪断奶后多系统衰竭综合征等相关疾病的重要病原。本文采用分子流行病学技术,系统分析了我国PCV2流行毒株的基因型、优势基因型和非优势基因型的转录差异、优势基因型流行的分子机制、ORF1基因和ORF2基因的进化。 采用聚合酶链式反应(PCR)技术对来自北京等地区的173份PCV2阳性样本的全长ORF2基因进行了扩增,并对扩增产物进行了限制性片段长度多态性(RFLP)分析。结果表明,我国PCV2流行毒株可分为9种(A～I)基因型,即CHN-2A、CHN-2B、CHN-2C、CHN-2D、CHN-2E、CHN-2F、CHN-2G、CHN-2H和CHN-2I,分别占0.6%、0.6%、0.6%、5.8%、8.6%、2.3%、2.3%、60.7%和18.5%,其中CHN-2H是我国PCV2流行毒株的优势基因型。对ORF2基因的序列分析表明,我国PCV2流行毒株之间有很高的同源性(89.2%～99.4%),与加拿大、美国、欧洲和亚洲其它国家的PCV2代表株也有很近的亲缘关系。我国PCV2流行毒株基因型与地域之间没有十分密切的联系。对我国PCV2流行毒株ORF2基因编码的结构蛋白的氨基酸序列分析表明,PCV2流行毒株存在3个高变区,分别位于57～90、121～136和180～191位的氨基酸区域。 采用Northern blot和RT-PCR技术对PCV2优势基因型(CHN-2H)的代表毒株(GD)和非优势基因型(CHN-2A)的代表毒株(BF)进行了PK15细胞培养的基因转录分析。结果表明,二者的转录本之间存在量和质的差别。两者都具有病毒复制酶蛋白RNA(Rep)和病毒核衣壳蛋白RNA(CR),但CHN-2A(BF)的Rep表达量大,CHN-2H的CR表达时间长。CHN-2A还具有CHN-2H所不具备的另外两个RNA(命名为Reps和AD)。 采用PCV2非优势基因型(CHN-2A)感染性克隆,基于PCV2优势基因型(CHN-2H)和非优势基因型(CHN-2A)之间基因转录本存在的差异,运用基因组定点突变技术构建了4个PCV2分子克隆,经体外转染PK15细胞和传代,用免疫酶组化染色和PCR技术分析拯救病毒的复制与增殖,结果表明,所有突变均不影响PCV2的DNA复制,在CR内部造成点突变的分子克隆(C3)也不影响病毒蛋白的合成,但在Rep内部造成点突变的分子克隆(R3)及通过起始密码子和共有二核苷酸的点突变,用于消除AD和Reps的分子克隆(A1016和S167)却严重影响PCV2蛋白的合成。分析表明,PCV2优势基因型毒株在体外培养时不能进行有效的蛋白合成与Rep内部特定的核苷酸改变、缺乏AD和Reps转录本等有关。 采用PCR技术,对PCV2 BF株的PK15细胞不同代次的培养物和临床血清样品进行了PCV2基因的检测。结果表明,PCV2的ORF1基因是不稳定的,易被丢失或降解;而ORF2基因较为稳定,完整的或部分的ORF2基因在体外可与PK15宿主细胞基因组发生整合,在体内可与腺病毒基因和/或反转录病毒基因发生重组而形成类PCV2因子。