苏云金芽孢杆菌和天蓝色链霉菌形态分化相关基因的功能研究

来源 :中国科学院微生物研究所 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zswf031124
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
芽孢杆菌和链霉菌属革兰氏阳性菌,具有相对简单的遗传物质和与发育分化相关的形态特征,它们独特的生物学特性使其成为了原核生物发育分化研究的模式材料。本论文以低G+C含量的苏云金芽孢杆菌和高G+C含量的天蓝色链霉菌为材料进行了以下两部分的研究工作:   第一部分:对苏云金芽孢杆菌芽孢形成相关基因-pdaA进行了功能研究。采用经典的遗传学方法构建了苏云金芽孢杆菌部分基因组文库,从中克隆到一个大小为2.8 kb的DNA片段。实验结果表明,从苏云金芽孢杆菌中克隆到的pdaA基因与蜡状芽孢杆菌,炭疽芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的多糖去乙酰化酶基因有很高的同源性。pdM基因的阻断不影响营养期芽孢杆菌的生长和产孢,但是明显影响芽孢的正常萌发。当以L-丙氨酸为诱导物时,pdaA阻断突变株在相差显微镜下呈浅灰色,OD600值下降明显未达到相同情况下野生型降低程度。pdaA基因阻断突变株在诱导萌发时停滞在此阶段,不能正常萌发。投射电子显微镜观察发现pdaA突变株芽孢皮层与野生型明显不同,推测pdaA基因突变表型是由于皮层中缺乏δ-内酰胺胞壁酸结构导致的。将野生型pdaA基因重新导入阻断突变株能恢复芽孢萌发,说明该突变表型确实而且只由pdaA基因造成的。RT-PCR分析表明在苏云金芽孢杆菌中,pdaA基因是在芽孢形成时期以单顺反子形式转录的。   对苏云金芽孢杆菌芽孢萌发相关基因-sleB进行了功能研究。采用经典的遗传学方法构建了苏云金芽孢杆菌部分基因组文库,从中克隆到一个大小约为4 kb的DNA片段。经序列分析表明,该片段含有四个完整的开放阅读框,其中包括完整的sleB基因。该基因编码的蛋白与蜡状芽孢杆菌,炭疽芽孢杆菌的皮层水解酶有很高同源性。采用双交换同源重组策略,在sleB基因内部插入一个红霉素抗性基因,得到sleB阻断突变株。在L-丙氨酸诱导后,其相对于野生型芽孢萌发延迟。转录分析表明sleB基因在芽孢形成时期开始转录。Western实验表明SleB蛋白在芽孢形成时以前体形式存在,而成熟芽孢中以剪切掉信号肽的成熟形式存在。   第二部分:对天蓝色链霉菌发育分化关键基因-ino1L进行了功能研究。通过PCR克隆得到天蓝色链霉菌sco3899基因,序列比对表明该基因编码一个1-磷酸肌醇合成酶,与结核分枝杆菌的ino1基因有较高同源性,于是将该基因命名为ino1L。通过同源双交换策略构建了该基因的阻断突变株,该阻断突变株表现严重的发育分化缺陷表型。通过肌醇浓度梯度平板观察,在不同的肌醇浓度上,ino1L阻断突变株表现不同的发育分化表型,扫描电子显微镜观察进一步确认了表型观察的结果。通过体内互补和RNA S1核酸酶保护实验,证明ino1L基因在链霉菌发育的各个阶段均有表达,具有两个转录起始为点,可能受不同调控因子调控。当ino1L三阻断突变株和野生型紧邻生长时,野生型菌株能够体外互补突变株表型。
其他文献
随着我国金融市场的不断完善与发展,金融衍生品也逐渐活跃起来,在金融市场中发挥着愈来愈重要的作用.但是,在开发金融衍生品的过程中,不可忽略风险管理,只有抓好风险管理工作
革兰氏阴性细菌的外膜蛋白于细菌与自然环境的交界处,在应对耐药、温度、化学因子、渗透压以及宿主防御等外界环境因素变化中起重要作用。因此研究细菌的外膜蛋白 (outer memb
请下载后查看,本文暂不支持在线获取查看简介。 Please download to view, this article does not support online access to view profile.
随着国家颁布一系列紧缩银行信贷政策和改革措施,房地产传统融资管理渠道已难以有效支撑公司正常经营发展,对房地产企业经营战略发展造成实质影响.本文从目前我国房地产行业
面对环境污染和能源短缺的双重压力,清洁经济的分布式发电技术得到了广泛的应用。但大规模分布式电源的并网运行会对大电网的安全可靠运行造成不可忽略的影响。为了防止这一弊端,微电网的概念应运而生。微电网既能高效的利用新能源,又能参与电力市场管理,具有灵活性强,交互性好的特点。根据微电网中母线电流的性质,可以将微电网划分为直流微电网、交流微电网以及交直流混合微电网三种类型。与后两者相比,直流微电网具有效率高
目前抗体已成为疾病治疗、临床诊断和科学研究中的关键蛋白质分子。抗体库筛选是被广泛用于获得和优化抗体的手段。传统抗体库筛选技术多使用单链抗体形式。虽然有其优点,但构
国有资产的保值增值对国家的经济发展至关重要.由于市场经济体系不断改革优化及经济政策的反复调整,从市场及环境方面而言,国有企业面临着更为严峻的挑战,特别是在投融资管控
期刊
融资是企业发展过程中的重要组成部分,同时也是企业获得稳定发展的关键起点.企业为取得良好的发展,实现经济效益最大化,应当顺应时代的发展,科学、合理地选择最合适的融资方
该论文系统阐述了城市地系统规划理论现状及城市绿地建设中存在诸多问题,提出以生态学原理指导城市绿地建设.该文对城市园林经地的特征、城市园林绿地功能、城市生态学与绿地
农村金融是当前我国新农村建设的重要组成部分,也是我国社会与经济发展的重要环节.目前,我国农村金融生态的建设整体处于不断上升的状态.但与我国整体经济经发展相比,仍存在
期刊