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卵巢上皮性癌(epithelial ovarian cancer,EOC,简称卵巢癌)是女性最常见的妇科恶性肿瘤之一,由于缺乏敏感有效的肿瘤标志物,使得卵巢癌的早期确诊率很低,尽管应用现代抗肿瘤药物配合肿瘤细胞减灭术治疗,晚期卵巢癌患者的5年生存率依然较低,约为30%。术后复发和肿瘤耐药成为卵巢癌治疗的最大难题,因此新的卵巢癌治疗手段的研发是妇科亟待解决的问题。有研究发现包括卵巢癌在内的多种人类肿瘤组织中miR200家族表达谱发生改变。许多学者在对犬的肾细胞和人类的胰腺癌、直肠癌、前列腺癌和乳腺癌的肿瘤组织及其细胞株的研究中发现miR200c可以抑制ZEB1的表达。上皮向间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)与肿瘤的侵袭和转移密切相关。E-cadherin是钙依赖性跨膜粘连蛋白的一种,主要分布于上皮细胞表面,介导细胞间的粘附作用。波形蛋白(Vimentin)是间质细胞骨架中最主要的中间纤维蛋白,Vimentin被认为是间皮细胞的标志蛋白。E盒结合锌指蛋白(zinc finger E-box binding homeobox,ZEB)是一种重要的细胞核转录因子,它与E-cadherin基因的启动子序列中的锌指结构结合可以抑制E-cadherin的表达。间皮素(Mesothelin)是一种肿瘤表面抗原,它在上皮性卵巢癌组织中的表达显著上调。有研究表明间皮素能增强卵巢癌细胞的增殖及粘附侵袭能力。间皮素与CA125互为配体。国内关于miR200c对卵巢癌细胞的增殖及侵袭迁移能力的影响鲜有报道。目的:通过瞬时转染miR200c mimic,上调卵巢癌细胞株SKOV3、HO-8910细胞中miR200c的表达,观察miR200c对卵巢癌细胞的增殖及侵袭迁移能力的影响,初步探讨miR200c对卵巢癌细胞增殖及侵袭迁移的调控机制。方法:1将SKOV3、HO-8910细胞分别分为:空白对照组、miR200c mimic处理组、negative control处理组,RT-PCR检测各组细胞中miR200c的相对表达量。2MTT法检测转染不同浓度miR200c mimic(0nmol/L、25nmol/L、50nmol/L、100nmol/L、200nmol/L),培养不同时间(24h、48h、72h),对SKOV3、HO-8910细胞的增殖能力的影响。3Transwell小室检测各组细胞迁移及侵袭能力的变化。4应用Western blotting检测各组中ZEB1、E-cadherin、Vimentin的表达变化。5酶联免疫吸附实验检测间皮素和CA125的表达。6统计方法:试验数据应用SPSS13.0统计软件处理,各实验均重复3次。计量资料以均数±标准差(x±s)表示,各组间的比较采用单因素方差分析,检验水准α=0.05。当P<0.05时,差异有统计学意义。结果:1RT-PCR检测各组miR200c的相对表达量。 SKOV3-mimic和HO-8910-mimic细胞内miR200c的表达与SKOV3和HO-8910相比明显增高(P<0.05),而SKOV3-neg和HO-8910-neg的miR200c表达与SKOV3和HO-8910相比差异无显著性(P>0.05)。2MTT检测miR200c对SKOV3和HO-8910细胞增殖的影响。转染不同浓度的miR200c mimic后SKOV3与HO-8910细胞的增殖均无明显改变(P>0.05)。转染相同浓度的miR200c mimic培养不同的时间对SKOV3、HO-8910的增殖亦无明显改变(P>0.05)。3miR200c抑制细胞的侵袭能力。上调miR200c的表达后,SKOV3-mimic、HO-8910-mimic与SKOV3、HO-8910组相比穿过基质膜细胞数明显减少(P<0.05)。而SKOV3-neg、HO-8910-neg组细胞数与SKOV3、HO-8910组相比细胞数无明显改变(P>0.05),提示miR200c可以显著抑制SKOV3、HO-8910细胞的侵袭能力。4miR200c抑制细胞的迁移能力。上调miR200c的表达后,SKOV3-mimic组和HO-8910-mimic组与SKOV3组和HO-8910组相比迁移到滤膜下的细胞数明显减少且差异有统计学意义,P<0.05,SKOV3-neg组、HO-8910-neg组与SKOV3、HO-8910组相比,差异无统计学意义,P>0.05,提示SKOV3-mimic和HO-8910-mimic细胞的迁移能力显著被抑制。5Western blotting检测ZEB1、Vimentin、E-cadherin的相对表达量。SKOV3-mimic和HO-8910-mimic中的ZEB1和Vimentin的表达减少而E-cadherin的表达上调,与空白对照组相比表达均有显著差异(P<0.05);SKOV3-neg和HO-8910-neg的ZEB1、E-cadherin、Vimentin与SKOV3和HO-8910相比均无明显(P>0.05)。6酶联免疫吸附实验检测CA125和间皮素的表达。 SKOV3-mimic组和HO-8910-mimic组与SKOV3和HO-8910组相比,CA125和间皮素的表达显著降低(P<0.05)。 SKOV3-neg、HO-8910-neg组与SKOV3、HO-8910组相比,CA125、间皮素的表达无显著差异(P>0.05)。结论:1上调miR200c可以显著抑制细胞的迁移和侵袭能力,但对细胞的增殖能力无明显影响。2转染miR200c mimic可显著上调卵巢癌细胞SKOV3、HO-8910中的miR200c表达,实验组ZEB1、Vimentin的表达显著降低,而E-cadherin的表达明显增高,表明在卵巢癌细胞中可能存在miR200c/ZEB1/E-cadherin调控机制,miR200c可能通过该通路抑制卵巢癌细胞的侵袭及迁移能力。3上调miR200c后,CA125、间皮素的表达显著降低,说明miR200c可能通过调控间皮素/CA125的表达抑制细胞的侵袭及迁移能力,具体调控机制有待进一步研究。