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恶性肿瘤对人体的健康存在严重危害。恶性肿瘤常用的治疗方式为化疗。顺铂是肺癌、卵巢癌的一线化疗药物。这些肿瘤对顺铂耐药往往导致治疗失败。在顺铂耐药的多种机制中,以GST过表达介导的肿瘤耐药机制普遍存在于耐药肿瘤细胞中。为解决顺铂化疗耐药这一大难题,以GST为靶点设计低毒高效的肿肿瘤耐药增敏剂并试图用于临床势在必行。本实验室前期研究发现,自主合成的芳香酰胺类高同工酶选择性GSTM抑制剂EBEA对卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP,COC1/DDP具有明显的增敏作用。在此基础上,本文检测了EBEA同系列化合物对耐顺铂细胞的增敏作用,发现EDEA对卵巢癌细胞SKOV3/DDP,肺癌A549/DDP具有明显增敏作用,构建其移植瘤模型,发现EDEA与顺铂联用对移植瘤生长具有抑制作用。EDEA对卵巢癌细胞COC1/DDP具有潜在抗肿瘤作用。以下是本研究运用到的方法,以及结果结论:CCK-8细胞增殖凋亡实验检测EDEA对正常细胞HEK293、LO2毒性作用,低毒剂量均为1μM;还检测了对各肿瘤细胞株:SKOV3,SKOV3/DDP,COC1,COC1/DDP,A549,A549/DDP的毒性作用,在低毒剂量下,测定EDEA对SKOV3/DDP,A549/DDP增敏作用,发现2μM的EDEA对SKOV3/DDP,A549/DDP增敏3倍左右。用流式细胞术检测了不同的耐药细胞株经药物处理后细胞凋亡情况,在正常细胞耐受的EDEA浓度下,EDEA与低浓度顺铂联用,与对照组相比细胞凋亡率增加。Western-blot检测细胞内Caspase-3、Bcl-xL、Bak、Bax和Bcl-2表达。发现一定浓度EDEA作用后,耐药细胞对DDP敏感性增加,Western-blot检测显示抑制剂与低浓度的DDP协同作用于耐药细胞时,Bcl-2家族中促进凋亡的蛋白表达量增加,而抑制凋亡的蛋白表达减少。用皮下成瘤的方法构建了裸鼠移植瘤模型,观察EDEA与顺铂联用治疗肿瘤的效果。将SKOV3/DDP,A549/DDP细胞复苏培养,将其以1×107/site接种于Balb/C裸鼠背部皮下,建立人卵巢癌耐药动物模型和人非小细胞肺癌耐药动物模型。随机分为4组,溶剂组给予含0.2%吐温80和1%DMSO生理盐水,DDP组给予顺铂,EDEA组给予双依他尼酰乙二胺,联用组同时给予顺铂DDP和依他尼酰乙二胺EDEA,腹腔注射,每3/4天给药1次,共6/8次,观察各组成瘤情况,肿瘤生长情况,以及不同处理组对裸鼠体重,裸鼠的食欲精神状态。整个过程测量肿瘤瘤体积变化,制作肿瘤生长曲线,治疗结束后,处死,取瘤,称重,HE染色,TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡率,免疫组化检测CD31表达,Ki67表达。我们发现SKOV3/DDP模型鼠在第三次给药后联用组相对于对照组,瘤体积小,p<0.05。在接下来的给药过程中,差异越来越显著p<0.01。A549/DDP模型鼠在治疗第六次后联用组相对于对照组,瘤体积小,p<0.05。TUNEL染色发现联用组瘤组织凋亡细胞明显多于对照组,p<0.05。Ki67染色发现联用组增殖细胞明显少于对照组,p<0.05。综上所述,本研究从细胞水平,动物水平,蛋白水平验证了EDEA对耐顺铂细胞SKOV3/DDP,A549/DDP,COC1/DDP增敏作用。发现低浓度的EDEA联合低浓度的顺铂对耐药株SKOV3/DDP,A549/DDP能发挥显著的增敏作用,EDEA联合顺铂对移植瘤模型生长抑制作用,进一步验证了EDEA对耐药株的增敏作用。EDEA对COC1/DDP虽不能发挥增敏作用,但在低于正常细胞低毒剂量的剂量下,能使细胞大量凋亡,与是否和顺铂联用无关。推测EDEA对COC1/DDP具有潜在的抗肿瘤作用。EDEA发挥增敏作用及抗肿瘤作用的机制与Bcl-2家族成员参与的启动凋亡途径的细胞通路密切相关。需进一步验证。