烟雾病外周血小细胞外囊泡特异性miRNAs的筛选及功能验证

来源 :南昌大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wlhlesley
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目的:目前尚缺乏诊断烟雾病的特异性生物标记物。研究表明,外周血小细胞外囊泡(s EV)内的微小核糖核酸(miRNAs)对多种疾病具有一定的诊断价值。本研究旨在对烟雾病患者外周血s EV内的miRNAs进行测序分析,从中筛选出烟雾病特异性miRNAs,并对目标miRNAs进行功能验证,以期探讨miRNAs在烟雾病发病机制中的潜在作用,并为烟雾病的诊断提供一种特异性靶标。方法:招募60例在2020年11月到2022年12月期间于南昌大学第二附属医院神经外科就诊的烟雾病患者以及同时间段相匹配的26例健康志愿者。收集烟雾病患者的临床资料。采集烟雾病患者和健康志愿者外周血并分离s EV于-80℃保存。miRNAs测序筛选烟雾病外周血s EV内差异表达的miRNAs,并通过定量逆转录PCR(q RT-PCR)验证。绘制受试者工作特征(ROC)曲线以评价目标miRNAs对烟雾病的诊断效能。根据q RT-PCR验证结果探讨目标miRNAs与烟雾病术前脑卒中的关系。通过划痕实验、细胞增殖实验和小管形成实验探讨目标miRNAs对人脑微血管内皮细胞(hCMEC/D3)血管生成功能的影响。结果:两组间的年龄、C反应蛋白和中性粒细胞百分比等基线数据无统计学差异。测序结果表明,与健康对照组相比,烟雾病组外周血s EV内表达上调的miRNAs有78个、下调的有41个。在ROC曲线分析中,miR-377-5p、miR-433-5p和miR-1264的AUC分别是0.85、0.85和0.95。miR-433-5p在烟雾病缺血性脑卒组显著高表达。miR-377-5p、miR-433-5p和miR-1264抑制hCMEC/D3的迁移。miR-1264抑制hCMEC/D3的增殖,但miR-377-5p、miR-433-5p对其增殖无明显影响。miR-377-5p、miR-433-5p和miR-1264对hCMEC/D3的成管功能无显著影响。结论:烟雾病外周血s EV内的miRNAs存在显著的差异表达。miR-377-5p、miR-433-5p和miR-1264可能是诊断烟雾病的潜在生物标记物。miR-1264可能通过抑制hCMEC/D3的迁移、增殖参与烟雾病的发生发展。
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