油料及制品的PCR安全监测技术研究

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芝麻是我国常用的油料作物,风味独特且具有相对较高的营养和药用价值。芝麻种子含杂量较大,储藏期间芝麻间隙较小,通透性较差,在高温季节,容易吸湿返潮,发生霉变,其中黄曲霉是主要的污染真菌之一。黄曲霉毒素,主要由黄曲霉和寄生曲霉等霉菌产生,为1类致癌物。黄曲霉毒素为黄曲霉的代谢产物,通过PCR法鉴定芝麻油中的黄曲霉DNA,确定油料芝麻是否存在黄曲霉污染,进而可判断芝麻油中的黄曲霉毒素的污染情况,该方法具有对设备的要求低、耗时短、操作简便、相对安全等优点。转基因食品的安全性问题一直都是全世界人民关注与讨论的焦点,为此我国建立了标识制度以满足消费者的知情权及消费权。但是除了市面上主流的大牌大豆产品进行了转基因成分标识外,其他小商贩贩卖的大豆产品(如现榨豆浆,豆腐、卤豆干等)少见标识,需要建立一套监控技术体系加强监督。本文以DNA为靶标建立了芝麻油中黄曲霉污染的检测技术及大豆制品中的转基因成分检测技术,得到如下结论。1.结合实验室常用的CTAB法、SDS法、试剂盒法,以及对传统SDS法进行改良过的SDS法进行比较和分析,得出改良过的SDS法提取的DNA质量较高,优于其他三种方法,而本实验的改进提取法相对于前人的改进提取法做出了简单的优化,节省了很大一部分的实验时间,同时也使实验步骤更简洁完善。2.应用PCR检测技术,对不同储藏时长的压榨芝麻油及大豆油进行DNA的提取,然后用不同扩增长度的引物进行PCR实验,得出在压榨成油的条件下,DNA不易保存,随着时间降解的速度较快。在相关PCR实验中应选取小片段的引物为佳。3.用定量黄曲霉对新鲜灭菌的芝麻进行人为污染,随后充分混匀并逐次梯度稀释,用实验室SDS法提取黄曲霉DNA,找到对应的PCR关于芝麻油中黄曲霉的最低检浓度为4.97E-09 g/g。4.应用PCR检测技术,分别针对大豆外源基因CaMV35S、NOS终止子和内源凝集素(Lectin)设计引物,建立了PCR关于转基因大豆的检测方法,并对郑州市不同地区的30个无标识大豆制品进行检测,结果显示转基因大豆制品的市场占有率为33%。
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