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再生障碍性贫血(Aplastic Anemia, AA)通常是指原发于骨髓造血功能衰竭的综合征,是一种病因不明的少见的因造血干细胞障碍导致外周血细胞和骨髓细胞减少的疾病。AA患者骨髓最显著的病理特征是骨髓脂肪化。目前以抗胸腺细胞免疫球蛋白(Antithymocyte Globulin, ATG)或抗淋巴细胞免疫球蛋白(Antilymphocyte Globulin, ALG)为基础的免疫抑制疗法及造血干细胞移植(Hematopoietic Stem Cell Transplantation, HSCT)已大大改善了从的愈后,但因高昂的治疗费用、ATG/ALG治疗后高复发率、高感染率、供体来源、年龄因素及HSCT并发症等,使ATG/ALG治疗及HSCT在临床应用受到了很大的限制。适当浓度的三氧化二砷(arsenic trioxide, ATO)在体外可显著抑制健康成人骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells MSC)的成脂分化潜能,提示ATO极有可能可通过调控、纠正MSC成脂和成骨分化失衡而改变AA患者骨髓造血微环境异常。对AA患者骨髓造血微环境中骨髓MSC的成脂与成骨分化失衡的调节,无疑可为AA的治疗提供一新的切入点。本研究拟在确认AA患者骨髓MSC成脂和成骨分化异常的基础上,利用流式细胞术、实时荧光定量PCR及造血干祖细胞体外克隆等研究手段,体内外探讨ATO调控AA患者骨髓MSC成脂与成骨分化失衡的有效性。在此基础上,结合AA的主要发病机制,体内进一步探讨ATO联合免疫抑制疗法治疗AA的安全性与有效性,为治疗AA探索新方法。本研究分为基础研究部分和临床研究部分。第一部分基础研究部分三氧化二砷作用于再生障碍性贫血患者骨髓间充质干细胞的初步研究[目的]探讨ATO调控、纠正AA患者骨髓MSC成脂与成骨分化失衡的有效性。[方法]分别从初治AA患者和健康供者骨髓中分离出骨髓MSC,在实验组(AA患者BM-MSCs)加入ATO,对照组1(正常BM-MSCs)、对照组2(AA患者BM-MSCs)分别加入等量培养基,分别诱导成脂和成骨,采用细胞形态学观察、油红0染色、VonKossa染色及RQ-PCR等检测手段,检测ATO调控AA患者骨髓MSC成脂与成骨分化失衡的特性。[结果]对照组2较对照组1形成脂滴时间早、数量多且体积更大,更易向脂肪细胞分化。对照组2较对照组1出现钙盐沉积时间晚、体积小,成骨分化能力明显减弱。实验组较对照组2脂滴数量少、体积小而钙盐沉积增多,成脂分化相关基因LPL较对照组2表达明显降低,而成骨分化相关基因OST较对照组2表达明显升高,差异有统计学意义。[结论]ATO在体外可以纠正AA患者骨髓MSC成脂与成骨分化失衡。第二部分临床研究部分三氧化二砷联合环孢素治疗再生障碍性贫血的临床观察[目的]初步探讨ATO联合环孢素治疗AA的疗效与安全性。[方法]收集2007年4月至2012年5月期间在河南省肿瘤医院血液科接受ATO治疗的从患者。ATO：0.15mg/kg/d,避光连续静脉输注4小时以上,每天1次,连用5天,间隔2天,连用8周；如需要,可休息一周后,再重复上述用药方式一次,即总疗程不超过17周。环孢素(cyclosporin A CsA):5mg/kg/d,定期监测血药浓度,适当调整剂量,维持血浆药物谷浓度于150-250ng/ml之间,连续服用至实验结束后视具体疗效再做具体调整。治疗期间监测血常规、肝肾功能、心肌酶谱及心电图等相关辅助检查,定期复查患者骨髓细胞形态学及骨髓活检。观察ATO联合CsA治疗AA的疗效及毒副作用。[结果]共收集27例接受ATO治疗的AA患者。第8周时,3人获得了完全反应(complete response CR),11人获得了部分反应(partial response PR);第17周时,5人获得了CR,15人获得了PR。副作用不明显,给予积极对症治疗后均能耐受。[结论]ATO联合CsA可能会促进AA患者造血功能恢复。