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目的： 本课题研究人乳腺癌细胞MCF-7中MDM2调控p73α与ERα相互作用机制。 方法： 通过脂质体质粒转染法上调p73α、ERα、MDM2表达及通过siRNA干扰下调MDM2表达，结合免疫共沉淀（Co-IP）分别检测MDM2与p73α、ERα之间蛋白的相互结合及通过蛋白印迹（Western Blot)检测p73α、ERα、MDM2蛋白表达情况。 1.免疫共沉淀法（Co-IP）检测MDM2与ERα、p73α之间蛋白的相互结合： 实验分组：第1组（PcDNA group）、第2组(p73α group)、第3组（ERα group）、第4组（p73α and ERα group）、第5组（p73α and MDM2 group），按分组转染相应质粒，分别于18h后加入MG-132蛋白酶抑制剂作用6 h，通过抗M DM2多克隆抗体结合MDM2抗原，最后用蛋白A-琼脂糖珠子（Protein A-Agarose）将抗原抗体复合物捕获，经免疫印迹检测蛋白之间相互结合。 2.蛋白印迹（Western Blot)检测目的蛋白p73α、ERα、MDM2的表达：通过阳离子脂质体瞬间转染法分别将 p73α、ERα、MDM2质粒及MDM2 siRNA按分组转染MCF-7细胞，通过蛋白印迹法（Western Blot)分别检测p73α、ERα、M DM2在蛋白水平的表达情况。 结果： 1、Co-IP显示，MDM2能与p73?、ERα结合形成复合体。 2、Western Blot显示，MDM2能下调p73α表达及上调ERα表达。第2组（p73α group）与第7组（p73α and MDM2 group）中p73α的灰度比值（1.02±0.01,0.00±0.00 P<0.01）。第3组（ERα group）与第5组(ERα and MDM2 gro up)中ERα的灰度比值（1.15±0.02,1.37±0.06 P<0.01）。 3、Western Blot显示，MDM2能下调p73α表达，降低p73α对ERα的抑制作用而上调ERα表达。第4组（p73α and ERα group）与第7组（p73α,ERα and MDM2 group）中p73α的灰度比值（0.72±0.02,0.00±0.00P<0.01），ERα的灰度比值（0.80±0.02,1.29±0.02 P<0.01）。 4、Western Blot显示，MDM2 siRNA能上调p73α表达，增强p73α对ERα抑制作用而下调ERα表达。第4组（p73α and ERα group）与第5组（p73α,ERαand MDM2siRNA group）中p73α的灰度比值（0.48±0.01,1.30±0.01P<0.01），ERα的灰度比值（0.39±0.02,0.00±0.00 P<0.01）。 结论： 1. MCF-7乳腺癌细胞中MDM2蛋白能与ERα、p73α蛋白结合形成复合体。 2. MCF-7乳腺癌细胞中MDM2能下调p73α表达，降低p73α对ERα的抑制作用而上调ERα表达。 3. MCF-7乳腺癌细胞中MDM2 siRNA能上调p73α表达，增强p73α对ERα的抑制作用而下调ERα表达。